Efecto de las conformaciones oligoméricas y fibrilares del péptido beta amiloide en el metabolismo del 2-araquidonoilglicerol de terminales sinápticos

PASCUAL, A.C.; GAVEGLIO, V.L.; GIUSTO, N.M.; PASQUARÉ, S.J.

San Luis

Jornada; VII Jornadas de Bioquímica y Biología Molecular de lípidos y lipoproteínas; 2017

El sistema endocannabinoide es un sistema de señalización celular ampliamente distribuido en el organismo. Este sistema está formado por ligandos endógenos o endocannabinoides, las enzimas que participan en su metabolismo, y los receptores mediante los cuales ejercen su acción. Una de las funciones más conocidas de los endocannabinoides es la regulación de la plasticidad sináptica, cumpliendo así un rol neuroprotector a nivel del Sistema Nervioso Central. El 2-araquidonoilglicerol (2-AG) es uno de los endcoannabinoides más relevantes. El mismo es sintetizado a partir de fosfolípidos de membrana mediante la acción de las enzimas diacilglicerol lipasa (DAGL) o lisofosfatidato fosfohidrolasa (LPAasa), es liberado al espacio sináptico y actúa sobre los receptores cannabinoides CB1 y CB2 de terminales presinápticos. Su nivel se encuentra estrictamente regulado mediante la degradación del mismo. Esta degradación se da principalmente por la hidrólisis a cargo de la enzima monoacilglicerol lipasa (MAGL). En estudios previos hemos demostrado una desregulación del metabolismo del 2-AG en terminales sinápticos de corteza cerebral (CC) de rata durante el envejecimiento. La Enfermedad de Alzheimer (EA) es una patología neurodegenerativa que está estrechamente relacionada con la senilidad. En cerebros post mortem de pacientes que han padecido la EA se observa un incremento en el péptido beta amiloide (βA), tanto en forma de depósitos de fibrillas como en su conformación de oligómeros solubles más pequeños. Se cree que este péptido sería el agente neurotóxico de la EA, aunque en la actualidad existen controversias en cuanto a la conformación del mismo que resulta nociva para las neuronas. El objetivo del presente trabajo es analizar el efecto de oligómeros y fibrillas del péptido βA en el metabolismo del endocannabinoide 2-AG. Para ello el péptido βA se ?envejeció? mediante su incubación durante 2 horas, a 37 °C, con agitación de 300 rpm, para la obtención de oligómeros; y durante 22 horas más, a 37 °C, con agitación de 150 rpm, para la obtención de fibrillas. Sinaptosomas de CC de ratas adultas (4-6 meses) fueron incubados con el péptido en sus diferentes conformaciones durante 10 minutos a 37 °C. Los sinaptosomas se obtuvieron mediante centrifugación diferencial y posterior purificación en gradientes de ficoll. Luego de esta incubación se realizaron estudios de microscopía electrónica de transmisión (MET), evaluación de la liberación de lactato deshidrogenasa (LDH), y medición de las actividades de las enzimas LPAasa, DAGL y MAGL utilizando sustratos radiomarcados específicos. Los resultados demuestran que los oligómeros del péptido βA provocan daño en la membrana sinaptosomal y, a su vez, disminuyen la disponibilidad del 2-AG en los terminales sinápticos debido a una menor actividad de síntesis vía DAGL. Contrariamente, las fibrillas incrementan la disponibilidad de este endocannabinoide por un aumento de su síntesis, aunque también provocan daño en la membrana sinaptosomal. Sin embargo, el daño fue significativamente menor cuando se ensayó una mayor concentración de fibrillas. Estos resultados evidencian un efecto diferencial del péptido βA en el metabolismo del 2-AG que depende de la conformación de dicho péptido.