Papel De La PI3K En La Modulación Del Receptor Para Fractalquina (CXCR1), En Monocitos Humanos.

RAMOS M.V; FERNANDEZ G.C; FERNANDEZ-BRANDO R.J; BENTANCOR L; LANDONI V.I; ISTURIZ M.A; PALERMO M.S

Mar del Plata

Congreso; Reunión Anual de la SAI/SAIC; 2007

Papel De La PI3K En La Modulación Del Receptor Para Fractalquina (CXCR1), En Monocitos Humanos. Ramos M.V, Fernandez G.C, Fernandez-Brando R.J, Bentancor L, Landoni V.I, Isturiz M.A, Palermo M.S La fractalquina (CX3CL1), quimioquina expresada en endotelio inflamado, actúa como molécula de adhesión interactuando con su receptor, CX3CR1, presente en monocitos (Mo). La interacción entre CX3CL1-CX3CR1 podría contribuir al daño renal en el Síndrome Urémico Hemolítico. Analizamos la modulación de CX3CR1 en Mo con factores inflamatorios ó anti-inflamatorios. Se purificaron Mo de sangre periférica y se incubaron durante 20 hs en Medio, IL-10 (10ng/ml) ó IFN-γ (240U/ml) para analizar la expresión de CX3CR1 mediante citometría de flujo. Se observó un descenso significativo en el porcentaje de Mo CX3CR1+ durante el cultivo, el cual se inhibe en presencia de IL-10 ó IFN-γ (0h: Medio =80±2%; 20h: Medio= 49±4%*, IL-10=73±4%#,IFN-γ =67±9#); *p<0.05 vs 0h, #p<0.05 vs 20h Medio; n=8). El efecto de IL-10 se bloquea en presencia de los inhibidores de PI3K: LY294002 (30μM) y wortmanina (Wo, 100nM), (IL-10+Wo=29±9%; IL-10+Ly=49±8%, n=3). Efectos similares se observaron con IFN-γ. Los inhibidores de síntesis proteica, cicloheximida (CHX;1µg/ml) y actinomicinaD (ActD;0.5µg/ml), también evitan este descenso. (Medio=23.9±7.25; CHX= 48.5± 9.7#; ActD= 76.8± 2.7; #p<0.05 vs. Medio, n=4). Se validó el modelo en células THP1, previamente diferenciadas con PMA (5ng/ml) durante 48hs. (Medio= 67±3%, IL-10: 81±3%*, IFN-γ:72±6%*,(*p<0.05 vs Medio, n=7); IL-10+Wo=55±8%; IL-10+Ly=56±7%,n=3, p<0.05 vs IL-10). Luego, con la técnica de Western Blot, se analizó la activación de los factores de transcripción, Stat3 y Stat1, implicados en el mecanismo de transducción de IL-10 e IFN-γ. Se encontró que IL-10 fosforila a ambos factores mientras que el IFN-γ sólo al Stat1. Concluimos que la expresión de CX3CR1 es modulada por factores inflamatorios/anti-inflamatorios, y que la actividad de PI3K está implicada en los mecanismos de transducción de IFN-γ e IL-10. Además, la CHX y ActD impiden el descenso de CX3CR1, probablemente evitando la expresión de novo de alguna proteína implicada en dicha modulación