Cultivos Bi y Tri-Dimensionales de Líneas Celulares Derivadas de Melanoma Espontáneo Canino como Modelo in Vitro Para el Ensayo del Sistema HSVtk/GCV

GIL CARDEZA ML, VILLAVERDE MS, ALTAMIRANO NA, FINOCCHIARO LME Y GLIKIN GC.

Hospital de Oncología "Angel H. Roffo"

Jornada; XXII Jornadas Multidisciplinarias de Oncología “Angel H. Roffo”. Instituto de Oncología; 2007

Pacientes de melanoma canino fueron sometidos a cirugía. A partir de los tumores extraídos se establecieron 6 líneas celulares derivadas de melanoma espontáneo canino de origen oral, Sc, Rk (recidiva), Br, Bk, Rd, Cl. Estas líneas fueron caracterizadas por análisis de: (i) morfología por tinción con hematoxilina/eosina, (ii) tiempos de duplicación por conteo bajo microscopio con azul tripán y (iii) capacidad de formar esferoides sobre agar in vitro. Los cultivos de Sc, Rd, Bk y Rk presentan principalmente células fibroblastoides que se adhieren débilmente a la superficie de cultivo, mientras que los de Br y Cl presentan células fibroblastoides de mayor tamaño que se unen normalmente a dicha superficie. Todas las líneas forman esferoides que fueron caracterizados respecto a su tamaño y grado de compactación. Por transferencia mediada por liposomas catiónicos, se ensayó la sensibilidad de las líneas caracterizadas al sistema gen suicida timidina kinasa del virus herpes simplex en presencia concentraciones crecientes de la pro-droga ganciclovir (0.01, 0.1, 1; 10; 100; 1000 mg/ml) con repiques bajos (RB)de las líneas Rk, Br, Bk, Cl y Rd (R5 a R30 aproximadamente) y con repiques altos (RA) de Sc y Rk (R50-R80 aproximadamente). Se comprobó que todas las líneas eran sensibles al sistema gen suicida HSVtk/GCV siendo las más sensibles Bk, Rk (RB), Rk (RA) y Sc. Tienen una tasa de supervivencia para la dosis de 1 mg/ml GCV, con respecto a b-gal 0 mg/ml GCV, de 16%, 38%, 38% y 30% respectivamente. En todos los casos los esferoides resultaron más resistentes que sus respectivas monocapas, debido al efecto denominado resistencia multicelular. A la misma concentración de GCV (1 mg/ml) la tasa de supervivencia de los esferoides con respecto a su monocapa es: 4,6; 1,6; 1,4 y 3,0 veces mayor en Bk, Rk (RB), Rk (RA) y Sc respectivamente Se utilizó la metodología de citometría de flujo para evaluar el efecto de GCV sobre el ciclo celular de la línea Sc. La lipofección de Sc con HSVtk/GCV llevó a una acumulación de las células en  fase S mientras un 31,3 % quedó en la región apoptótica sub-G1. HSVtk/GCV indujo un aumento de la fracción hiperploide. Estos resultados fueron consistentes con los obtenidos por tinción con Naranja de Acridina/Bromuro de Etidio.