COMPARACIÓN DE LAS RESPUESTAS A LA LIPOFECCIÓN CON GEN SUICIDA Y DE INTERFERÓN BETA CANINO DE CULTIVOS BI Y TRI DIMENSIONALES DERIVADOS DE MELANOMA ESPONTÁNEO CANINO

M L GIL CARDEZA 1, M S VILLAVERDE 1, G C GLIKIN 1, L ME FINOCCHIARO

Mar del Plata

Congreso; SAIC REUNIÓN LIII; 2008

Para validar el uso de esferoides como modelo predictivo de la respuesta tumoral in vivo se comparó la sensibilidad a la terapia génica de monocapas (2D) y esferoides (3D) de 13 líneas celulares (de altos y bajos repiques) derivadas de melanoma espontáneo canino (Ak, Bk, Br, Bt, Cl, Ds, Fk, Kg, Ll, Rd, Rk II, Sc, Tk). Inmediatamente después de la cirugía, los tumores fueron disgregados enzimática y/o mecánicamente y los explantos obtenidos fueron cultivados manteniendo una heterogeneidad celular similar a la original. Mediante MTS se ensayó la viabilidad celular a la lipofección con el gen interferón beta canino (cIFN-B) o con el gen suicida timidina kinasa del virus herpes simplex (HSVtk) seguida por el agregado de concentraciones crecientes de la pro-droga ganciclovir (GCV: 0,01 a 1000 ug/ml). Cuando las células fueron cultivadas en monocapa, 6 de 13 líneas (Ak, Bk, Kg, Rk II, Sc y Tk) mostraron valores de supervivencia (VS) (día 5) al sistema HSVtk/GCV menores al 50% para la dosis 10 ug/ml GCV (respecto a B-Gal y 10 ug/ml GCV); mientras que mediante la lipofección con el gen cIFN-B sólo 2 de 11 líneas (Ak y Rk II) lo hicieron. Cultivadas como esferoides, las células lipofectadas tanto con HSVtk como con cIFN-B no presentaron VS (día 12) menores al 50% debido al fenómeno de resistencia multicelular (MCR), sin embargo respondieron en similar medida a ambos tratamientos. Se encontraron 7 de 13 líneas dentro del rango VS entre 50 y 80% para el sistema HSVtk/10 ug/ml GCV y 6 de 11 dentro del mismo rango para la lipofección del gen cIFN-B. Se determinó el índice MCR (iMCR) cómo:(% supervivencia 3D - % supervivencia 2D)/% supervivencia 2D. El iMCR resultó inversamente proporcional al % supervivencia 2D, probablemente debido al  denominado “efecto de recrecimiento” descripto para tumores in vivo, dónde, al morir las células de las capas externas del tumor, las células quiescentes de capas intermedias quedan expuestas y comienzan a dividirse “repoblando” el tumor.