CONCENTRACIONES FISIOLOGICAS DE BILIRRUBINA NO CONJUGADA (BNC) PREVIENEN LA COLESTASIS INDUCIDA POR ESTRÉS OXIDATIVO (EO) EN EL HÍGADO AISLADO Y PERFUNDIDO DE RATA (HAPR)

BASIGLIO CL; TOLEDO FD; ARRIAGA SM; OCHOA JE; SANCHEZ POZZI EJ; MOTTINO AD; ROMA MG

Rosario

Congreso; XVII Congreso Argentino de Hepatología; 2013

Asociación Argentina para el Estudio de las Enfermedades del Hígado (AAEEH)

Introducción: En estudios previos en duplas de hepatocitos aislados, demostramos que el EO provoca falla secretora por internalización endocítica de transportadores canaliculares responsables de la formación de bilis (Bsep y Mrp2), por alteración de la integridad del citoesqueleto de actina. La bilirrubina es considerada actualmente un importante antioxidante endógeno, y sus niveles aumentan en colestasis. Si la bilirrubina contribuye a limitar la colestasis por EO es incierto, aunque resultados previos ?in vitro? de nuestro grupo así lo sugieren. Objetivo: Confirmar la capacidad de la bilirrubina no conjugada (BNC) para limitar las alteraciones de la función secretora biliar inducida por el pro-oxidante modelo tert-butilhidroperóxido (t-BOOH) en el HAPR, un modelo que mantiene la integridad funcional y estructural del órgano intacto. Métodos: En HAPR, se evaluaron los cambios temporales en: a) la relación entre glutatión oxidado (GSSG) y total (oxidado+reducido, GSHt) en bilis, un parámetro que refleja el EO intracelular; b) el flujo biliar; c) la excreción biliar del sustrato de Bsep, taurocolato (TC), adicionado al perfusato; d) la excreción biliar del sustrato de Mrp2, dinitrofenil glutatión (GS-DNP), previa adición al perfusato de su precursor cloro-dinitrobenceno (CDNB). Al finalizar la perfusión, se tomaron muestras de tejido hepático para evaluar la localización de los transportadores canaliculares y del citoesqueleto de actina, por doble tinción con anticuerpos primarios específicos y secundarios fluorescentes (para Bsep y Mrp2) y faloidina-Alexa Fluor 568 (para actina). Resultados: t-BOOH (75 µM, 10 min) indujo un aumento agudo y transitorio en la relación GSSG/GSHt en bilis (+167±28%), y la pre-perfusión con BNC previno totalmente este fenómeno (p