PAPEL DE LAS PROTEÍNAS QUINASAS ACTIVADAS POR MITÓGENO (MAPKS) EN LA ALTERACIÓN DE LA FUNCIÓN SECRETORA CANALICULAR INDUCIDA TERT-BUTILHIDROPERÓXIDO (TBOOH) EN DUPLAS DE HEPATOCITOS DE RATA (DAHRS)

TOLEDO FD; BASIGLIO CL; BOAGLIO AC; SANCHEZ POZZI EJ; ROMA MG

Buenos Aires

Congreso; XVI Congreso Argentino de Hepatología; 2011

Asociación Argentina para el Estudio de las Enfermedades del Hígado (AAEEH)

Introducción y Objetivos: El estrés oxidativo (EO) se presenta como una parte importante de su mecanismo fisiopatológico de muchas hepatopatías. Estudios previos de nuestro grupo demostraron que el agente pro-oxidante modelo tBOOH induce alteraciones en la función secretora hepatocanalicular de DAHRs vía activación de isoformas de proteína quinasa C dependientes de Ca2+ (Free Rad Biol Med 40: 2005-17, 2006; Toxicol Sci 91: 150-8, 2006). Estas quinasas median la desorganización del citoesqueleto de actina, la consecuente disrupción de las uniones estrechas intercelulares y la internalización endocítica de transportadores canaliculares responsables de la formación de bilis Bsep y Mrp2. Dado que las MAPKs podrían actuar como efectores cascada abajo de cPKC, en este estudio indagamos la participación de vías de señalización de las isoformas de MAPKs de tipo ERK, JNK y p38MAPK en los efectos deletéreos funcionales del tBOOH en DAHRs. Resultados: El tBOOH (125μM) disminuyó la capacidad de las DAHRs para secretar apicalmente el sustrato de Bsep colil-lisil-fluoresceína (-50±4%, p<0.005). Los inhibidores selectivos de MAPKs de tipo ERK 1/2 (PD098059, 5mM), de tipo JNK (SP600125, 1μM) y de tipo p38MAPK (SB203580, 1μM) previnieron parcialmente esta alteración (PD098059:+28±5; SP600125:+34±5; SB203580:+29±4; n=6, p<0.05). Con el de Mrp2 glutation-metil-fluoresceína, tBOOH (125μM) disminuyó su excreción apical en DAHRs (-52±4%, p<0.005), y los inhibidores selectivos de MAPKs previnieron parcialmente esta alteración (PD098059:+28±3; SP600125:+31±2; SB203580:+31±3, n=5, p<0.05). Técnicas de inmunomarcado seguido de microscopía confocal revelaron que tBOOH (125μM) indujo marcada internalización de Bsep y Mrp2, y que el pretratamiento con los diferentes inhibidores de MAPKs previnieron parcial pero significativamente estas alteraciones. Por otra parte, el tBOOH (125μM) produjo un aumento de un 50% de protrusiones de membrana plasmática ("blebs"), un marcador preliminar de la alteración del citoesqueleto de actina, y los inhibidores de MAPKs previnieron parcialmente esta alteración (PD098059:+31±3; SP600125:+29±2; SB203580:+25±3, n=3, p<0.05). Conclusión: Las MAPKs de tipo p38MAPK, ERK y JNK participan parcialmente en las alteraciones funcionales y morfológicas inducidas por tBOOH sobre la capacidad de DAHRs para secretar sales biliares al canalículo biliar, promoviendo la internalización endocítica de transportadores canaliculares y la desorganización del citoesqueleto de actina.