CONCENTRACIONES FISIOLÓGICAS DE BILIRRUBINA NO CONJUGADA (BNC) PREVIENEN LA INJURIA OXIDATIVA HEPATOCELULAR

BASIGLIO CL; TOLEDO FD; SANCHEZ POZZI EJ; MOTTINO AD; ROMA MG

Buenos Aires

Congreso; XVI Congreso Argentino de Hepatología; 2011

Asociación Argentina para el Estudio de las Enfermedades del Hígado (AAEEH)

Introducción y Objetivos: Estudios previos de nuestro grupo demostraron que el estrés oxidativo (EO) provoca colestasis por internalización endocítica de transportadores canaliculares de sales biliares (Bsep) y glutation (Mrp2), responsables de la formación de bilis; este hecho estaría involucrado en la patogénesis y progresión de hepatopatías colestásicas. La bilirrubina es un potencial antioxidante endógeno cuyos niveles plasmáticos aumentan en hepatopatías, pero su papel citoprotector en estas condiciones es incierto. En este trabajo se evaluó la capacidad de BNC para limitar la injuria oxidativa hepatocelular y las alteraciones de localización y función de transportadores canaliculares asociada a la misma, usando el tert-butilhidroperóxido (t-BOOH) como pro-oxidante modelo. Métodos: Se utilizaron tres modelos: i) hepatocitos aislados de rata (HAR), con determinación de la lipoperoxidación de membranas, por la formación de sustancias reactivas al ácido tiobarbitúrico (TBARS); ii) duplas aisladas de hepatocitos de rata (DAHR), determinándose a) la función secretora biliar mediante la evaluación de la secreción apical de los sustratos de Bsep y Mrp2, colil-lisil-fluoresceína y glutation-metil-fluoresceína (generado intracelularmente a partir de diacetato de cloro-metil-fluoresceína), respectivamente, y b) el nivel de “blebbing” (protrusiones de la membrana plasmática); iii) hígado aislado y perfundido de rata,  evaluándose cambios en el flujo biliar. Resultados: HAR se pre-trataron con BNC a concentraciones fisiológicas (1,7–17,1 µM) y luego con t-BOOH (500 µM). BNC previno en aproximadamente 40% (p<0,05; n=4) la lipoperoxidación de membranas inducida por t-BOOH. t-BOOH (25–125 µM) disminuyó progresivamente la capacidad de las DAHR para secretar apicalmente los sustratos de Bsep y Mrp2, mientras que BNC (17,1 µM) previno esta falla secretora en aproximadamente 70% (p<0,05; n=4), independientemente del sustrato analizado. Técnicas de inmunomarcado seguido de microscopía confocal revelaron que t-BOOH (125 µM) indujo una marcada internalización de Bsep y Mrp2, y que el pretratamiento con BNC (17,1 µM) previno significativamente estas alteraciones. Cuando las DAHR se sometieron a la acción de t-BOOH, estas mostraron un nivel de “blebbing” de aproximadamente 70%, mientras que el pretratamiento con BNC redujo este porcentaje a 30 (p<0,05; n=3). Cuando se perfundió el hígado de rata con t-BOOH (75 µM), se produjo una caída del flujo biliar respecto del control, y BNC (2 µM) previno esta caída en aproximadamente 80% (p<0,05; n=3).  Conclusión: Concentraciones fisiológicas de BNC contrarrestan la injuria oxidativa hepatocelular mediante la prevención de la internalización endocítica y la subsecuente falla funcional de transportadores canaliculares relevantes para la secreción biliar (Bsep y Mrp2), evidenciando un rol citoprotector funcional del pigmento en hepatopatías que cursan con estrés oxidativo asociado.