Efecto protector de bilirrubina no conjugada (BNC) sobre la lisis hepatocelular mediada por complemento (C)

BASIGLIO CL; ARRIAGA SM; PELUSA HF; ALMARÁ AM; ROMA MG; MOTTINO AD

Mar del Plata (Argentina)

Congreso; I Congreso Conjunto de Sociedades Biomédicas (SAIC-SAI-SAFE-SAB-SAB-SAN-SAF); 2004

SAIC-SAI-SAFE-SAB-SAB-SAN-SAF

Previamente demostramos que la BNC inhibe la actividad hemolítica del C por la vía clásica. El objetivo del presente trabajo fue analizar el efecto del pigmento sobre la lisis hepatocelular inducida por anticuerpos (Ac) y mediada por C. Se obtuvo un Ac policlonal por inoculación de conejos con membranas plasmáticas de hepatocitos de rata. Posteriormente, se aislaron hepatocitos de rata y se incubaron con Ac y C (suero de rata fresco), en ausencia y presencia de distintas concentraciones de BNC. La lisis hepatocelular se evaluó midiendo la actividad de lactato deshidrogenasa (LDH) en los sobrenadantes por método cinético. Los % de inhibición en la liberación de LDH obtenidos para BNC 2,5; 5; 10 y 20 mg/dl (n=3) fueron respectivamente: 11±7; 17±15; 52±21* y 95±5*; (*) p< 0,05 vs. control (sin BNC). El efecto del pigmento sobre la acción del C también se evaluó a través de la comprobación del depósito de C3 sobre la membrana de las células hepáticas por inmunofluorescencia indirecta. Se utilizaron como sustrato improntas de hepatocitos de rata, las cuales se incubaron con Ac y C, en ausencia y presencia de BNC (20 mg/dl). El C3 unido se evidenció con un anti- C3 de rata conjugado con isotiocianato de fluoresceína (FITC). Mientras que, en ausencia de BNC, se observó depósito fluorescente de anti-C3-FITC en la membrana, la fluorescencia fue negativa en presencia de BNC. Los resultados indican que BNC inhibe la lisis hepatocelular mediada por C en forma dosis dependiente y sugieren que este efecto se ejercería sobre la unidad de reconocimiento y/o de activación de la vía clásica del C. El conocimiento de los mecanismos que modulan negativamente la acción del C podría contribuir al diseño de estrategias terapéuticas conducentes a mitigar los efectos inflamatorios en enfermedades que cursan con activación del C y afectan la integridad del hepatocito.