La bilirrubina no conjugada (BNC) inhibe la unión de C1q a anticuerpos dirigidos contra la membrana del hepatocito

BASIGLIO CL; PELUSA HF; ARRIAGA SM; ALMARÁ AM; ROMA MG; MOTTINO AD

Mar del Plata (Argentina)

Congreso; L Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC); 2005

SAIC

En un estudio previo se demostró que BNC inhibe la lisis hepatocelular inducida por Ac y mediada por complemento (C), utilizando un antisuero obtenido por inoculación de conejos con membranas de hepatocitos de rata (MHR) y suero de rata como fuente de C. El objetivo del presente trabajo fue establecer si la acción inhibitoria del pigmento se ejerce sobre el subcomponente C1q. En una primera etapa, se purificó el Ac por precipitación salina con sulfato de amonio y posterior cromatografía de afinidad en proteína A-sefarosa. La especificidad del Ac purificado se determinó por: a) inmunofluorescencia indirecta sobre improntas de hepatocitos de rata utilizando como revelador un antisuero antiinmunoglobulinas de conejo conjugado con isotiocianato de fluoresceína y b) ELISA en tiras de poliestireno sensibilizadas con MHR, utilizando como Ac secundario anti-IgG de conejo conjugado con peroxidasa. El efecto inhibitorio de BNC sobre C1q se comprobó mediante un ELISA, evaluando la capacidad del pigmento para inhibir la fijación de C1q al Ac purificado inmovilizado en tiras de poliestireno. Los % de inhibición obtenidos para BNC 1,0; 2,5; 5,0; 10,0 y 20,0 mg/dl (n=6) fueron respectivamente: 27±6; 34±5; 30±2; 52±9* y 67±3* (*) p<0,05 vs. BNC 1,0; 2,5 y 5,0 mg/ dl. Para verificar la unión de BNC a C1q, se realizó un ensayo de dot-blot sobre membranas de polivinildifluoruro, sembrando cantidades equimolares de C1q, albúmina sérica humana (ASH, control positivo) e IgG (control negativo). Después de la incubación con [(14)C]-BNC, las d.p.m. obtenidas (n=3) fueron respectivamente: 6828±323*; 5016±274*; 668±29 (*) p<0,05 vs. IgG. Se concluye que el pigmento interfiere, en forma dosis dependiente, con la interacción entre C1q y el Ac purificado. Este efecto se debería a la unión de BNC a dicho subcomponente del sistema del C.