Fosfatidilinositol-3 quinasa (PI3K) esta involucrada en la alteracion secretora de sales biliares inducida por estradiol-17beta-glucuronido (E17G) en duplas aisladas de hepatocitos de rata (DAHR)

CROCENZI FA; SANCHEZ POZZI EJ; P¡§¦REZ LM; BASIGLIO CL; OCHOA JE; PELLEGRINO JM; MOTTINO AD; ROMA MG

Mar del Plata (Argentina)

Congreso; L Reunion Anual de la Sociedad Argentina de Investigacion Clinica (SAIC); 2005

Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC)

PI3K modula diversos procesos hepatocelulares, incluyendo la funci¨®n secretora biliar. Su activaci¨®n es requerida en cuadros colest¨¢sicos, como aquel inducido por taurolitocolato. E17G es un metabolito estrog¨¦nico end¨®geno colest¨¢sico que ha sido postulado como posible mediador en la colestasis grav¨ªdica. En este trabajo, evaluamos el rol de PI3K en la disfunci¨®n secretora de sales biliares inducida por E17G en DAHR. Las DAHR fueron obtenidas mediante doble perfusi¨®n con colagenasa, enriquecidas mediante elutriaci¨®n y cultivadas 5 hs para permitir la recuperaci¨®n de su polaridad secretora. Luego, se incubaron con el inhibidor de PI3K Wortmanina (WM, 100 nM y 1¦ÌM, 45 min) y posteriormente con E17G (50 ¦ÌM, 20 min) en presencia de WM. Finalmente, se adicion¨® una sal biliar fluorescente, la colil-lisilfluoresce¨ªna (CLF) durante 5 min para permitir su captaci¨®n y luego se agregaron nuevamente los compuestos en estudio para evaluar su efecto sobre el transporte canalicular. Se cuantific¨®, a partir de microfotograf¨ªas, el porcentaje de DAHR que mostraban fluorescencia visible en sus vacuolas canaliculares (test de acumulaci¨®n canalicular de CLF, acCLF), as¨ª como la cantidad de CLF acumulada en dichas vacuolas (como porcentaje de CLF celular total). Los resultados (media¡ÀES) se analizaron por ANOVA. La acCLF fue disminuida por E17G (16¡À2 vs 68¡À4; p<0,05 vs control). WM no afect¨® a ambas dosis la acCLF y previno el efecto de E17G (WM 100nM+E17G: 24¡À2; WM 1¦ÌM+E17G: 34¡À3; p<0,05 vs E17G y control). La cantidad de CLF acumulada apicalmente fue disminuida por E17G (5,9¡À0,4 vs 14,1¡À1,1; p<0,05 vs control); este efecto fue parcialmente prevenido por WM (9,1¡À0,7; p<0,05 vs E17G y control). Concluimos que la alteraci¨®n del transporte de sales biliares inducida por E17G depende parcialmente de la activaci¨®n de PI3K inducida por este agente colest¨¢sico.