Papel de las proteínas quinasas activadas por mitógeno (MAPKs) en la alteración de la función secretora canalicular inducida tert-butilhidroperóxido (tBOOH) en duplas de hepatocitos de rata (DAHRs)

TOLEDO FD; BASIGLIO CL; BOAGLIO AC; SANCHEZ POZZI EJ; ROMA MG

Mar del Plata - Argentina

Congreso; LV Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC); 2010

Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC)

Estudios previos de nuestro grupo demostraron que el agente pro-oxidante modelo tBOOH induce alteraciones en la función secretora hepatocanalicular de DAHRs vía activación de isoformas de proteína quinasa C dependientes de Ca2+. Estas quinasas median la desorganización del citoesqueleto de actina, con la consecuente disrupción de las uniones estrechas intercelulares y la internalización endocítica de transportadores canaliculares responsables de la formación de bilis Bsep y Mrp2. Dado que las MAPKs podrían actuar como efectores cascada abajo de cPKC, en este estudio indagamos la participación de vías de señalización de las isoformas de MAPKs del tipo ERK, JNK y p38MAPK en los efectos deletéreos funcionales del tBOOH en DAHRs, un modelo polarizado “in vitro” para el estudio del transporte hepatobiliar. tBOOH (125 µM) disminuyó la capacidad de las DAHRs para secretar ápicalmente el sustrato de Bsep colil-lisil-fluoresceína (-50±4%, p<0.005). Los inhibidores selectivos de MAPKs del tipo ERK 1/2 (PD098059, 50 mM), del tipo JNK (SP600125, 10 µM) y del tipo p38MAPK (SB203580 y SB202190, 1 µM y 50 µM, respectivamente) previnieron parcialmente esta alteración (PD098059: +28±5; SP600125: +34±5; SB203580: +29±4; >200 duplas en cada grupo, n = 6, p<0.05). Esencialmente, los mismos resultados se obtuvieron con el sustrato de Mrp2 glutation-metil-fluoresceína (generado intracelularmente a partir de diacetato de clorometil-fluoresceína). Técnicas de inmunomarcado seguido de microscopía confocal revelaron que tBOOH (125 µM) indujo marcada internalización de Bsep y Mrp2, y que el pretratamiento con los diferentes inhibidores de MAPKs previnieron parcial pero significativamente estas alteraciones. Concluimos que las MAPKs del tipo p38MAPK, ERK y JNK participan parcialmente en las alteraciones funcionales inducidas por tBOOH sobre la capacidad de DAHRs para secretar sales biliares al canalículo biliar promoviendo la internalización endocítica de transportadores canaliculares.