DESARROLLO DE TÉCNICAS COLORIMÉTRICAS PARA DETERMINAR LA VIABILIDAD IN VITRO DE TETRATIRIDIOS DE MESOCESTOIDES CORTI

FABBRI JULIA; ALBANI CLARA MARÍA; PENSEL, PATRICIA; ELISSONDO MARIA CELINA

Mar del Plata

Encuentro; XIII Biólog@s en Red 2018; 2018

Para evaluar la viabilidad de los tetratiridios (TT) de Mesocestoides corti, el ensayoestándar consiste en la observación de la motilidad de los parásitos. El objetivo fuedesarrollar tinciones que permitan diferenciar TT vivos de muertos. Se estudiaron loscolorantes eosina 0.05%, azul de metileno 0.01%, ioduro de propidio (IP, 2μg/ml) ydiacetato de fluoresceína (FDA, 0.5μg/ml). Inicialmente se tiñeron y observaron a distintostiempos TT vivos y muertos por calor (24h-65°C). Una vez seleccionada la mejor técnica,ésta fue evaluada en un ensayo de viabilidad in vitro de larvas de M. corti incubadas con50 y 250μg/ml de timol-DMSO. Se utilizaron como control TT incubados en medio decultivo-DMSO y TT muertos por calor. Se determinó viabilidad a las 24 y 48h.Con azul de metileno los TT vivos no se tiñeron, mientras que los muertos se observaronde color azul, pero, luego de 1h, los TT vivos comenzaron a incorporar el colorante,observándose zonas azules. En cambio, con la eosina, los TT muertos se tiñeron de rosa,mientras que los TT vivos no tomaron el colorante, independientemente del tiempo decontacto. Con IP-FDA, los TT vivos se observaron teñidos intensamente con FDA (verdes)y levemente con IP (rojo), ocurriendo lo opuesto con los TT muertos. La tinción con eosinafue seleccionada para realizar la prueba con timol. El control mantuvo 100% de viabilidaddurante todo el experimento. Los TT muertos por calor estaban todos muertos desde elinicio del experimento. Con el tratamiento timol50 se observó una viabilidad de 90.2% alas 24h que disminuyó a 87.3% a las 48h. Con timol250 se observaron todos los TTmuertos a las 24h. En conclusión, la técnica elegida para determinar la viabilidad de losTT de M. corti, por su sencillez, bajo costo y fidelidad, es la tinción con eosina.