Estudios morfológicos y bioquímicos de los efectos producidos in vitro por albendazole y timol sobre quistes de Echinococcus multilocularis.

ALBANI C. M.; PENSEL P.; FABBRI J.; ELISSONDO M. C.

La Plata

Congreso; III Congreso Panamericano de Zoonosis y VIII Congreso Argentino de Zoonosis.; 2014

Introducción. El estadio larval del parásito Echinococcus multilocularis es el agente causal de la equinococosis alveolar (EA), la cual se considera como la enfermedad causada por helmintos más letal para el hombre. La EA se caracteriza por tener un crecimiento infiltrante tipo tumoral que afecta mayormente al hígado de los hospedadores intermediarios (1). Para el tratamiento quimioterapéutico, se utilizan benzimidazoles como albendazole y mebendazole. Sin embargo, estos fármacos no producen un efecto parasiticida (2). Además de las fallas en los tratamientos farmacológicos, se han reportado efectos secundarios, lo que lleva a la interrupción del tratamiento (3). Por ello, la búsqueda de nuevas alternativas terapéuticas es de fundamental importancia. Por otro lado, los marcadores enzimáticos pueden ser usados como indicadores endógenos para identificar cambios celulares y proveer datos cuantitativos en respuestas farmacológicas. La detección de la enzima de membrana gamma-glutamil transferasa (GGT) en sobrenadantes de cultivos de protoescólices o quistes tratados con diferentes fármacos sería un indicador bioquímico de alteraciones tegumentarias (4). El objetivo de este trabajo fue evaluar el efecto parasiticida in vitro de albendazole y timol solos o combinados sobre quistes de E. multilocularis. Materiales y métodos. Los quistes extraídos de ratones de la cepa CF1 infectados experimentalmente fueron cultivados en medio 199 suplementado con glucosa y antibióticos y mantenidos en estufa a 37° C. Se colocaron 10 quistes por tubo Leighton conteniendo 10 ml de medio de cultivo, los cuales fueron tratados in vitro con 1, 5 o 10 µg/ml de albendazole o timol solos o combinados. Los cambios se registraron periódicamente utilizando microscopía óptica (MO) y electrónica de barrido (MEB). Además, se determinó la actividad de la enzima tegumentaria γ-glutamil transferasa utilizando el método Szasz modificado (laboratorio Wiener) con el objetivo de cuantificar el daño farmacológico. Resultados. El mayor efecto parasiticida fue obtenido con la combinación albendazole 10 µg/ml + timol 10 µg/ml la cual causó daños severos sobre los quistes. Mediante MO se observó pérdida de turgencia, adelgazamiento de las membranas quísticas y desprendimiento de la capa germinativa. Estos resultados se confirmaron a nivel ultraestructural utilizando MEB. Después de 10 días post-incubación, en los quistes tratados se observó un marcado daño sobre la capa germinativa, la cual presentó mayormente residuos celulares. Sólo se pudieron observar unas pocas células, las cuales estuvieron colapsadas y rodeadas por vesículas. Otro parámetro empleado para comprobar el daño causado por las drogas fue la liberación de la enzima tegumentaria γ-glutamil transferasa la cual se vió claramente incrementada en los quistes tratados. La combinación de albendazole y timol mostró una eficacia superior en comparación con las drogas por separado sobre quistes de E. multilocularis. Discusión. En trabajos posteriores se estudiará la eficacia de la combinación de fármacos sobre un modelo animal para evaluar su potencial aplicación para el tratamiento de la EA en humanos.