Optimización de la Metodología Utilizada en Ensayos de Permeación In Vitro en Piel de Cerdo

ANALÍA ROTELLI, VIVIANA MOURIÑO, GABRIEL PORTO, RODOLFO RUBIO GARCÍA

La Rural, Predio ferial de Buenos Aires

Jornada; JORFYBI 2005; 2005

SAFYBI - Asociación Argentina de Farmacia y Bioquímica Industrial

Introducción Los ensayos de permeación In Vitro son utilizados para la evaluación de la absorción dérmica y la penetración percutánea del principio activo en estudio en la etapa pre-clínica del desarrollo de formulaciones de aplicación tópica. Los objetivos del presente trabajo fueron: a) resaltar la importancia de reducir al mínimo posible la variabilidad en los resultados debido al tratamiento sobre el modelo de membrana empleado (orejas de cerdo) para lo cual fueron comparados lotes de orejas de cerdo sometidos a distintos tratamientos para eliminar el pelo; y b) optimizar el rasurado de la membrana. La comparación fue realizada en términos de pérdida transepidérmica de agua (TEWL) como método para determinar el grado de daño cutáneo2,3. Materiales y Métodos Se recibieron del frigorífico orejas “sin tratar” y “pre-tratadas”. Parte de los lotes “sin tratar” fueron tratados y denominados “W” (lote que solo fue tratado con máquina para cortar cabello), “W-CP” y “W-FP” (idem “W” y luego afeitada a contrapelo o a favor del pelo, respectivamente). Otro lote “sin tratar” fue sometido a agua 60ºC durante tres minutos, y otro fue tratado a 100ºC durante 90s. Un último lote “sin tratar” recibió un raspado manual contra superficie rugosa durante 30 minutos. “Pre-tratado” fue el lote recibido desde el frigorífico con un tratamiento que habitualmente se realiza para eliminar los pelos en la línea de faenamiento (inmersión en agua 60ºC/90 s., luego apaleado y finalmente llama directa). Luego las membranas fueron cortadas en forma circular (área = 3 cm²) y dermatomizadas. El procedimiento para la comprobación de daño cutáneo fue realizado siguiendo los procedimientos estándares descriptos utilizando celdas de Franz modificadas2,3. Inmediatamente después de emplazadas las membranas en las celdas se determinó la pérdida transepidérmica de agua como método físico para evaluar la integridad de la barrera cutánea utilizando un electrodo sensible a mínimos cambios de humedad. Un valor de TEWL > 20g/h/m2 fue considerado como un indicador de daño cutáneo bajo las condiciones experimentales propuestas. Resultados Los valores de TEWL (y como consecuencia los registros del sensor inferior de humedad) observados para la piel pre-tratada (línea de faenamiento) confirmaron el aparente daño cutáneo observado en forma macroscópica. Para los lotes: raspado manual/30 min; 60ºC/3 min; 100ºC/90 s los valores de TEWL ( y los registros del sensor inferior de humedad) indican claramente daño cutáneo aún cuando no fue observado un daño macroscópico apreciable (Fig 1). Por otra parte, los valores relativos de TEWL (y los registros del sensor inferior de humedad) para W-CP y W-FP respecto de W no permiten inferir que un tratamiento resulte más beneficioso que otro puesto que arrojan resultados similares (Fig. 2). Los resultados comparativos entre los distintos métodos utilizados (W; W-FP; W-CP) quedan sustentados con los resultados hallados al realizar un ensayo de permeación In Vitro con una droga modelo (Fig. 3) .                                 Conclusiones Se sugiere descartar aquellas membranas que, sin presentar daño macroscópico aparente, posean un valor de TEWL > 20 g/h/m2, bajo las condiciones experimentales utilizadas para la determinación, por ser considerado como un  indicador de daño de la barrera cutánea. Se decide utilizar el método (W-CP) para el rasurado de las membranas puesto que resulta más eficiente la eliminación de los pelos y no genera daño cutáneo. Figura 1: Valores de TEWL y registros del sensor inferior de humedad para distintos tratamientos de la membrana tomada como modelo (Piel de Orejas de Cerdo). Figura 2: Valores relativos de TEWL para el tratamiento W-AP y para W-CP  respecto de W tomado como referencia. Figura 3: Valores de flujo de droga en función del tiempo.