PARTICIPACION DE SARA COMO REGULADOR NEGATIVO DE LA VIA DE SEÑALIZACION DE TGFβ DURANTE EL DESARROLLO NEURONAL

VICTORIA ROZÉS SALVADOR; CARLOS WILSON; CHRISTIAN GONZALEZ BILLAULT; CECILIA CONDE

Cordoba

Congreso; Congreso Anual Sociedad de Biologia de Cordoba; 2019

Sociedad de Biologia de Cordoba

Diversos eventos son necesarios para un desarrollo neuronal adecuado, tales como la localización diferencial de proteínas, la dinámica del citoesqueleto y el tráfico de endosomas. Smad Anchor for Receptor Activation (SARA) es una proteína que se une a los endosomas tempranos; y lleva a cabo funciones específicas relacionadas con el tráfico, como así también se ha visto que participa en vías de señalización; tales como la vía del factor de crecimiento transformante β (TGFβ). En este sentido, se ha descrito que SARA recluta Smad2/3 y, por lo tanto, favorecer a la activación de dicha vía. Sin embargo, en ocasiones también puede modular la desfosforilación del receptor I de TGFβ (TβRI) e inactivar la vía tanto en células epiteliales como en líneas celulares (mediante la alteración de la unión de SARA con la proteína PP1c). Específicamente en sistema nervioso, ha sido demostrado que la señalización de TGFβ especifica el axón durante el desarrollo neuronal tanto in vitro como in vivo. Por otro lado, también ha sido reportado la participación de SARA en la especificación axonal, ya que esta se pierde cuando se suprime SARA mediante la expresión de shARN o utilizando ratones Knock Out (SARA KO). Sin embargo, se desconoce si SARA puede modular la vía de señalización de TGFβ durante el proceso de polaridad neuronal. Por este motivo, nos propusimos analizar la participación de SARA en la señalización de TGFβ durante el desarrollo neuronal. Para tal fin utilizamos cultivos de neuronas de hipocampo de 2 y 3 días in vitro (DIV). Resultados obtenidos mediante la técnica de FRET Acceptor Photobleaching muestran interacción física entre SARA y el receptor I de TGFβ (TβRI). Por otro lado, al realizar experimentos de pérdida y ganancia de función, encontramos que el fenotipo observado al utilizar una forma mutante de SARA (SARA-F728A) la cual tiene la capacidad de mantener el receptor TβRI hiperfosforilado, y por consiguiente, la ruta sobre-activada, es el mismo fenotipo que se observa bajo la supresión de SARA, esto es, mayor crecimiento axonal y pérdida de la especificación axonal, ya que las neuronas presentan más de un axón en comparación con la condición de control. Además, la transición de estadío de polaridad se acelera en dichas neuronas. Interesantemente, SARA-F728A también genera deslocalización de los endosomas SARA+. Por último, mediante FRET, también encontramos que SARA-F728A presenta mayor interacción con PP1c que las condiciones control, lo que sugiere que SARA arresta a PP1c impidiéndo la desfoforilación del receptor TβRI. En conjunto, estos resultados sugieren que SARA modula la vía de TGFβ en neuronas de hipocampo a través de la regulación negativa, lo que pareciera ser un requisito necesario para una correcta especificación axonal y localización de endosomas SARA+.