CAPACIDAD FORMADORA DE BIOFILM EN AISLAMIENTOS BOVINOS DE Staphylococcus aureus

FELIPE V ; SOMALE P ; VARRONI F ; RODRIGUES DA SILVA E ; BOHL L ; MORGANTE CA ; PORPORATTO C

Jornada; VIII Jornadas de Investigación UNVM; 2013

Staphylococcus aureus es uno de los principales patógenos responsables de la mastitis en rumiantes. Las infecciones ocasionadas por esta bacteria comienzan con episodios subclínicos o clínicos agudos y el subsiguiente desarrollo de formas crónicas. La persistencia de estas infecciones se relaciona con la habilidad de esta bacteria para formar biofilm y de esta forma evadir la respuesta inmune. El desarrollo de biofilm está asociado a la presencia del polisacárido extracelular poly-N-succinyl-β-1-6 glucosamina (PIA/PNAG) cuya biosíntesis se encuentra regulada por enzimas codificadas por el operón icaADBC. Alternativamente, la expresión de una proteína de superficie celular Bap estaría asociada a la formación de biofilm proteicos y sería un factor patogénico específico del huésped debido a que sólo ha sido identificada en S. aureus aislados de bovinos. El objetivo de este trabajo fue evaluar la habilidad de formación de biofilm y la distribución de los genes asociados, en infecciones de tipo Subclínicas (Sc), Clínicas (Cl) y Crónicas (Cr) producidas por S. aureus en bovinos. Se trabajó con 215 cepas de S. aureus aisladas de 15 tambos comerciales de Córdoba y Buenos Aires (Argentina), y se utilizó como control la cepa de S. aureus V329. Los aislamientos nativos fueron identificados como S. aureus mediante pruebas bioquímicas convencionales y confirmación mediante amplificación por PCR del gen 16S rRNA. Se determinó cuantitativamente la capacidad de formación de biofilm mediante cultivo en placa de poliestireno y tinción con cristal violeta (CV). Se evaluó por PCR la presencia de los genes icaA, icaD y bap en el genoma bacteriano, empleando cebadores específicos. El total de los aislamientos de S. aureus analizados demostraron capacidad de formación de biofilm según la técnica de CV. En los aislamientos provenientes de animales con mastitis Sc se encontró: 8/79 débiles, 25/79 moderadas y 46/79 fuertes formadoras de biofilms. En los casos Cl se encontró: 11/127 débiles, 48/127 moderada y 68/127 fuerte formadores de biofilms. Por último, para las infecciones Cr se observó: 1/9 débiles, 2/9 moderadas y 6/9 fuertes formadores de biofilms. Al evaluar la distribución de los genes asociados a biofilms, 53/79 aislamientos de infecciones Sc presentaron los genes icaA e icaD, mientras que en los aislamientos provenientes de casos Cl y Cr la totalidad mostraron ambos genes. La presencia del gen bap se detectó en 3/79 y 24/127 de los aislamientos de infecciones Sc y Cl, respectivamente. Sin embargo, en los aislamientos de infecciones Cr se encontró que el 100% de los casos expresaron el gen bap. Nuestros resultados demuestran que la capacidad fenotípica y genotípica de formación de biofilm de aislamientos de S. aureus provenientes de bovinos, varía según el tipo de infección establecida. Por otra parte, la presencia del gen bap en la totalidad de los aislados provenientes de casos Cr, evidencia que esta proteína desempeñaría un rol clave en el desarrollo de infecciones persistentes.