BUTIONINA-S,R-SULFOXIMINA AUMENTA EL EFECTO INHIBITORIO DEL 1,25(OH)2D3 SOBRE EL CRECIMIENTO DE CÉLULAS DE CÁNCER DE MAMA CON DIFERENTES FENOTIPOS

MARCHIONATTI A; BOHL L; LIAUDAT A; PICOTTO G; RODRÍGUEZ V; NARVÁEZ C; WELSH J; TOLOSA DE TALAMONI N

Congreso; XXIX Reunión Anual de la Asociación Argentina de Osteología y Metabolismo Mineral; 2012

Numerosos trabajos científicos describen efectos del 1,25(OH)2D3 sobre la proliferación, diferenciación, apoptosis, angiogénesis e invasión de células de cáncer de mama. Algunas respuestas se han confirmado in vivo pero acompañadas por un incremento indeseado en la calcemia de los animales de experimentación. Nuestra hipótesis es que el tratamiento conjunto de calcitriol con drogas que deplecionan glutatión (GSH) podría potenciar el efecto antiproliferativo del calcitriol, lo que permitiría emplear dosis más bajas del secoesteroide reduciéndose el efecto hipercalcemiante. En nuestro laboratorio se ha demostrado que butionina-S,R-sulfoximina (BSO), droga que disminuye el GSH intracelular, incrementa la acción antiproliferativa del 1,25(OH)2D3 en células de cáncer de mama MCF-7. Este efecto se produce por desequilibrio en el estado redox celular (debido principalmente a la generación de ROS) y arresto de las células en la fase G1 del ciclo celular (Bohl. y col., Cancer Inv., en prensa, 2012). El objetivo de este trabajo fue profundizar en los mecanismos moleculares inducidos en las células MCF-7 por el BSO y/o 1,25(OH)2D3 y extender el uso combinado de estas drogas a otras líneas celulares de cáncer de mama. Las células MCF-7 (modelo de tumor mamario positivo para el receptor de estrógeno), MCF-7DR (resistentes al 1,25(OH)2D3) y HMLER (modelo de tumor mamario triple negativo) se trataron con calcitriol 100 nM, BSO 20 µM o ambas drogas durante 4 días. El crecimiento celular se estudió con la técnica violeta de cristal. En las células MCF-7, la actividad de la enzima del sistema antioxidante superóxido dismutasa (SOD) se determinó por espectrofotometría. La apoptosis se estudió mediante detección de caspasas activas in situ (microscopía de fluorescencia) y la expresión relativa del ARNm del gen Bcl2 (RT-PCR en tiempo real). Los resultados se evaluaron mediante ANOVA seguido del test post-hoc de Bonferroni (significancia a p<0,05). BSO, 1,25(OH)2D3 y ambas drogas en forma conjunta inhibieron la viabilidad de las células MCF-7 y HMLER tratadas durante 96 hs. Las células HMLER fueron más sensibles al BSO que al 1,25(OH)2D3. El calcitriol provocó efecto mínimo sobre el número de células MCF-7DR y el BSO tuvo acción antiproliferativa pequeña que fue ligeramente mayor en las células co-tratadas. La actividad de la SOD fue mayor en las células MCF-7 expuestas al 1,25(OH)2D3 durante cuatro días y esta respuesta fue significativamente superior en las tratadas con ambas drogas. Se midieron valores de fluorescencia mayores (caspasas activadas) en las células MCF-7 tratadas con calcitriol y BSO durante tres y cuatro días. El tratamiento con 1,25(OH)2D3 durante 96 hs también indujo la activación de las caspasas en las MCF-7. El 1,25(OH)2D3 y el 1,25(OH)2D3 + BSO ocasionaron disminución en la expresión relativa del ARNm del gen Bcl2. En conclusión, el mayor efecto inhibitorio provocado por el co-tratamiento de las células MCF-7 con ambas drogas es provocado por un desequilibrio en el estado redox celular. La disminución en la expresión del gen antiapoptótico Bcl2 y la activación de las caspasas en las células MCF-7 tratadas con 1,25(OH)2D3 y 1,25(OH)2D3 + BSO corroboran que el efecto sobre el crecimiento es mediante apoptosis. Finalmente, el uso combinado de las drogas permitiría disminuir la dosis de calcitriol evitando el desbalance en el metabolismo  del calcio y podría ser de utilidad para combatir células que hayan adquirido resistencia al 1,25(OH)2D3 y tumores de mama triple negativos.