ALTERACIONES DE LA VIABILIDAD, EL CICLO CELULAR Y LA EXPRESIÓN DEL GEN TRPV6 PRODUCIDAS POR CALCITRIOL Y BSO EN CÉLULAS DE CÁNCER DE MAMA MCF-7

BOHL L ; LIAUDAT A; PICOTTO G ; MARCHIONATTI A ; RODRÍGUEZ V ; NARVAEZ C ; WELSH J ; TOLOSA DE TALAMONI N

Otro; XXVIII Reunión Anual de la Asociación Argentina de Osteología y Metabolismo Mineral; 2011

El calcitriol, la forma hormonal y activa de la vitamina D, está siendo evaluado como agente anti-cáncer por sus acciones anti-proliferativas, pro-apoptóticas y pro-diferenciadoras sobre varias líneas celulares malignas. Este efecto podría ser aumentado con drogas como L-Butionina-S,R-Sulfoximina (BSO) que inhibe la síntesis de glutatión (GSH), tripéptido natural abundante con propiedades antioxidantes. Dado que un alto porcentaje de casos de cáncer de mama diseminados presentan en algún momento de su evolución metástasis ósea, el estudio de los efectos de drogas que puedan ser utilizadas en el futuro como anticancerígenas resulta de utilidad para evitar las complicaciones óseas asociadas al cáncer. El objetivo de este estudio fue conocer las acciones del calcitriol y del BSO, en forma individual o conjunta, sobre las células de cáncer de mama MCF-7. Las células se trataron con calcitriol 100 nM, BSO 20 µM o ambas drogas a diferentes tiempos de exposición. El crecimiento celular se estudió con la técnica violeta de cristal. El contenido de GSH se midió por espectrofotometría y la producción de especies reactivas del oxígeno (ROS) por citometría de flujo. La apoptosis se estudió mediante el análisis de la morfología celular (contraste de fase y tinción con Hoechst) y técnicas inmunocitoquímicas (citocromo c y TUNEL). El porcentaje de células en cada fase del ciclo celular se midió por citometría de flujo y la expresión del gen TRPV6 se estudió por PCR en tiempo real. Los resultados se evaluaron estadísticamente mediante ANOVA y se utilizó el test de Bonferroni como test post-hoc (significancia a p<0,05). L-BSO, calcitriol y ambas drogas administrados en forma conjunta tuvieron un efecto de inhibición sobre la viabilidad de las células MCF-7 tratadas durante 96 hs. Este resultado también fue evidente a las 72 hs en células tratadas con calcitriol o con la combinación de drogas. El BSO produjo una disminución significativa de los niveles de GSH a las 48, 72 y 96 hs de tratamiento, este efecto se observó con el tratamiento combinado y en las células tratadas durante 72 y 96 hs con calcitriol. Las células expuestas durante 96 hs tanto al calcitriol como al calcitriol+BSO tuvieron porcentajes elevados de ROS con respecto a las tratadas con vehículo. Hubo incremento de la proporción de células en la fase G1 del ciclo celular en las MCF-7 tratadas con calcitriol y calcitriol+BSO durante 72 hs. Algunas células  tratadas con calcitriol y calcitriol+BSO durante 96 hs exhibieron condensación del citoplasma, núcleos con el material genético fragmentado, cuerpos apoptóticos y cambio de la localización del citocromo c. La expresión del gen TRPV6 fue aproximadamente seis veces mayor en las células tratadas con calcitriol o calcitriol+BSO durante 96 hs en comparación con las controles. Estos resultados indican que calcitriol y BSO provocan inhibición del crecimiento de las células MCF-7 a causa de un desequilibrio en el estado redox celular debido a la caída de los niveles de GSH y a la aparición de ROS. Además, el arresto de células en la fase G1 del ciclo celular provocado por el calcitriol y calcitriol+BSO contribuiría a la inhibición del crecimiento celular. La fragmentación del ADN y la liberación del citocromo c desde las mitocondrias pone en evidencia que la apoptosis estaría involucrada en el efecto antiproliferativo de calcitriol y calcitriol+BSO. La expresión significativamente mayor del gen del canal de calcio TRPV6 en las células tratadas con calcitriol y el tratamiento combinado durante 96 hs indica un posible rol del ión en la muerte celular producida por estas drogas.