EL CALCITRIOL INDUCE APOPTOSIS EN CÉLULAS DE CÁNCER DE MAMA Y SU EFECTO ES POTENCIADO POR DL-BUTIONINA-S,R-SULFOXIMINA.

PICOTTO G, BOHL L, LIAUDAT C, RODRÍGUEZ V, MARCHIONATTI AM, NARVÁEZ C, WELSH J, TOLOSA DE TALAMONI N

Foz do Iguaçu. Brasil

Congreso; 8° Congreso Iberoamericano de Osteología y Metabolismo Mineral (SIBOMM). Cumbre Iberoamericana de Osteoporosis. 3° Congresso Brasileiro de Densitometria, Osteoporose e Osteometabolismo (BRADOO); 2009

Entre las acciones no clásicas de la vitamina D, es conocido que el déficit de la misma puede aumentar el riesgo de sufrir algunos tipos de tumores, lo que sugirió el uso potencial del 1,25(OH)2D3 o calcitriol como un agente anticancerígeno alternativo al uso habitual de antiestrógenos en el cáncer de mama. El 1,25(OH)2D3 o calcitriol es un regulador negativo del crecimiento tanto in vitro como in vivo y esta inhibición se debe a la activación de la apoptosis por alteración de la función mitocondrial. Por otro lado se sabe que drogas que deplecionan glutation (GSH) pueden potenciar los efectos de drogas anticancerígenos. En nuestro laboratorio hemos demostrado que menadiona incrementa el efecto antiproliferativo del calcitriol en células tumorales de mama MCF-7 por estrés oxidativo (Marchionatti AM y col., J. Steroid Biochem. Mol. Biol 113: 227, 2009). El objetivo del presente trabajo fue estudiar las bases moleculares de los efectos antitumorales del calcitriol, utilizado en combinación con otra droga que deplecion GSH, DL-butionina-S,R-sulfoximina (BSO), para potenciar los efectos antiproliferativos del secoesteroide en células MCF-7. Para ello, las células fueron tratatadas durante 96 hs. con  calcitriol (100 nM), BSO (20 µM), calcitriol + BSO o vehículo (isopropanol). La proliferación celular se evaluó por la tinción con violeta de cristal. La apoptosis se determinó por la técnica de TUNEL y la localización del citocromo c, por inmunohistoquímica. Para evaluar el estrés oxidativo inducido en las células debido a los diferentes tratamientos, se midió la producción de especies reactivas de oxígeno (ROS) por citometría de flujo y el contenido total de GSH por espectrofotometría. El análisis estadístico de los resultados se realizó mediante Anova de una vía y test de Bonferroni como post-hoc. Los resultados obtenidos indican que tanto BSO como calcitriol inhiben la proliferación de las células MCF-7 en forma dependiente de la dosis y del tiempo de exposición. Este efecto fue mayor con el tratamiento conjunto de ambas drogas. Cuando las células fueron tratadas con BSO, calcitriol o con ambas drogas se visualizó la típica morfología de apoptosis mediante la técnica de Tunel. El secoesteroide y el uso combinado de ambos compuestos promovieron la liberación de citocromo c desde la mitocondria. La producción de ROS se incrementó con el tratamiento de BSO (+5%) y de calcitriol (+30%). El efecto fue mayor cuando ambos compuestos se utilizaron en forma conjunta (+43%). Los niveles totales de GSH disminuyeron con cualquiera de los tratamientos.    En conclusión, BSO potencia la inhibición de la proliferación inducida por calcitriol en las células tumorales de mama por un mecanismo de apoptosis en el que confluyen la depleción de GSH, la formación de ROS y la ruptura de la función mitocondrial. Esto haría posible reducir la dosis de calcitriol necesaria para inducir apoptosis, y evitar así la hipercalcemia secundaria provocada por la utilización de concentraciones mayores del calcitriol.