EFECTOS DE LA VITAMINA D3 Y DL-BUTIONINA-S,R-SULFOXIMINA SOBRE EL CRECIMIENTO DE CÉLULAS INTESTINALES NEOPLÁSICAS MALIGNAS

LIAUDAT AC; BOHL LP; TOLOSA DE TALAMONI NG; MALETTO B; PISTORESSI MC; PICOTTO G

Jornada; XIV Jornadas Científicas Anuales Sociedad de Endocrinología y Metabolismo de Córdoba (SEMCO); 2012

El c¨¢ncer colorrectal es una de las principales causas de muerte por tumores malignos en la Rep¨²blica Argentina por lo que su tratamiento es tema de intensa investigaci¨®n. Estudios epidemiol¨®gicos sugieren que la vitamina D3 y su metabolito activo, el 1,25(OH)2D3 o calcitriol, disminuyen el riesgo de contraer c¨¢ncer de colon. Por otro lado, el empleo de drogas oxidantes tales como D,L-butionina-S,R-sulfoximina (BSO), aumentan la sensibilidad de las c¨¦lulas neopl¨¢sicas a los tratamientos. El objetivo de nuestro trabajo fue determinar el efecto del calcitriol y BSO sobre la proliferaci¨®n de las c¨¦lulas de c¨¢ncer de colon y evaluar los posibles mecanismos involucrados. Las c¨¦lulas Caco-2, derivadas de adenocarcinoma de colon humano, se trataron con calcitriol (1-200 nM),  BSO (2-500 ¦ÌM), ambas drogas o veh¨ªculo a distintos tiempos de exposici¨®n. La viabilidad celular se determin¨® por la t¨¦cnica violeta de cristal. La actividad de las enzimas del sistema antioxidante catalasa (CAT) y super¨®xido dismutasa (SOD), as¨ª como la de la enzima marcadora de diferenciaci¨®n celular fosfatasa alcalina (FAL) y los niveles de glutati¨®n (GSH) se midieron por espectrofotometr¨ªa. La apoptosis se evalu¨® por las t¨¦cnicas de TUNEL, tinci¨®n nuclear con DAPI y externalizaci¨®n de fosfatidil serina. El potencial de membrana mitocondrial y el ciclo celular se evaluaron por citometr¨ªa de flujo. El proceso de autofagia se analiz¨® midiendo la cantidad de organelas vesiculares ¨¢cidas (OVAs) formadas por tinci¨®n con naranja de acridina. Los datos se analizaron estad¨ªsticamente mediante el test de ANOVA a una v¨ªa seguido del test de Bonferroni como post-hoc (p< 0,05). Los resultados demuestran que tanto calcitriol como BSO inhibieron el crecimiento de las c¨¦lulas Caco-2, efecto que result¨® dependiente del tiempo y de la concentraci¨®n de la droga utilizada. El contenido total de GSH disminuy¨® a las 6 y 48 hs con BSO y con el tratamiento combinado. A las 96 hs la actividad de CAT aument¨® solo con el tratamiento combinado mientras que la actividad SOD no se modific¨®. El potencial de membrana mitocondrial y la actividad de FAL aumentaron en las c¨¦lulas tratadas con 1,25(OH)2D3  y con el 1,25(OH)2D3 + BSO. El tratamiento conjunto indujo arresto del ciclo celular en S/G2 y en consecuencia, disminuci¨®n del n¨²mero de c¨¦lulas en la fase de mitosis. Si bien la fragmentaci¨®n del ADN result¨® positiva en c¨¦lulas tratadas con BSO y BSO+calcitriol, no se observaron cambios en la morfolog¨ªa nuclear (tinci¨®n con DAPI), ni alteraciones en la localizaci¨®n de la fosfatidil serina. Sin embargo, cuando se evalu¨® la formaci¨®n de OVAs, se observ¨® aumento en el n¨²mero de las mismas con los tres tratamientos. En conclusi¨®n, BSO incrementa el efecto inhibitorio del crecimiento inducido por el 1,25(OH)2D3 sobre las c¨¦lulas Caco-2 mediante arresto del ciclo celular, muerte presumiblemente por autofagia y aumento del estr¨¦s oxidativo, el cual puede ser s¨®lo parcialmente compensado por el sistema enzim¨¢tico antioxidante. Adem¨¢s, el incremento de FAL sugiere que el calcitriol induce la diferenciaci¨®n celular.