EFECTOS ANTITUMORALES DE LA VITAMINA D3 Y DL-BUTIONINA-S,R-SULFOXIMINA EN CÉLULAS INTESTINALES NEOPLÁSICAS MALIGNAS

LIAUDAT AC; BOHL LP; TOLOSA DE TALAMONI NG; MALETTO B; PISTORESSI MC; PICOTTO G

Jornada; XXVIII Jornadas Multidisciplinarias de Oncología del Instituto Ángel H. Roffo; 2012

El c¨¢ncer colorrectal es la segunda causa de muerte por tumores malignos en la Rep¨²blica Argentina por lo que su tratamiento es tema de intenso estudio. La incidencia y el pron¨®stico de esta enfermedad est¨¢n en estrecha relaci¨®n con los niveles plasm¨¢ticos de 25(OH)D3, mol¨¦cula precursora del 1,25(OH)2D3 (calcitriol), metabolito de mayor acci¨®n biol¨®gica de la vitamina D3. Por otro lado, el empleo de drogas oxidantes tales como D,L-butionina-S,R-sulfoximina (BSO), aumentan la sensibilidad de las c¨¦lulas neopl¨¢sicas a los tratamientos. El objetivo de nuestro trabajo fue determinar el efecto del calcitriol y BSO sobre la proliferaci¨®n de las c¨¦lulas de c¨¢ncer de colon y evaluar los posibles mecanismos involucrados. Las c¨¦lulas Caco-2, derivadas de adenocarcinoma de colon humano, se trataron con calcitriol (1-200 nM),  BSO (2-500 ¦ÌM), ambas drogas o veh¨ªculo a distintos tiempos de exposici¨®n. La viabilidad celular se determin¨® por la t¨¦cnica violeta de cristal. La actividad de las enzimas del sistema antioxidante catalasa (CAT) y super¨®xido dismutasa (SOD), as¨ª como la de la enzima marcadora de diferenciaci¨®n celular fosfatasa alcalina (FAL) y los niveles de glutati¨®n (GSH) se midieron por espectrofotometr¨ªa. La apoptosis se evalu¨® por las t¨¦cnicas de TUNEL, tinci¨®n nuclear con DAPI y la externalizaci¨®n de fosfatidil serina. El potencial de membrana mitocondrial y el ciclo celular se evaluaron por citometr¨ªa de flujo. El proceso de autofagia se determin¨® por tinci¨®n con naranja de acridina y PCR en tiempo real (LC3). Los resultados se analizaron estad¨ªsticamente mediante el test de ANOVA a una v¨ªa seguido del test de Bonferroni como post-hoc (p< 0,05). Los resultados demuestran que tanto calcitriol como BSO inhibieron el crecimiento de las c¨¦lulas Caco-2, efecto que result¨® dependiente del tiempo y de la concentraci¨®n de la droga utilizada. El contenido total de GSH disminuy¨® a las 6 y 48 hs con BSO y con el tratamiento combinado. A las 96 hs la actividad de CAT aument¨® solo con el tratamiento combinado mientras que la actividad SOD no se modific¨®. El potencial de membrana mitocondrial y la formaci¨®n de autofagosomas incrementaron con el calcitriol y BSO+calcitriol. La actividad de FAL aument¨® en las c¨¦lulas tratadas con 1,25(OH)2D3  y con ambas drogas. El ciclo celular no se alter¨® con los distintos tratamientos. La fragmentaci¨®n del ADN result¨® positiva en c¨¦lulas tratadas con BSO y BSO+calcitriol. En conclusi¨®n, BSO incrementa el efecto antiproliferativo del 1,25(OH)2D3 sobre las c¨¦lulas Caco-2 mediante aumento del estr¨¦s oxidativo, el cual puede ser s¨®lo parcialmente compensado por el sistema enzim¨¢tico antioxidante. El incremento de FAL sugiere inducci¨®n de la diferenciaci¨®n celular debida al calcitriol. La muerte celular de las c¨¦lulas Caco-2 sobrevendr¨ªa como resultado de la estimulaci¨®n de autofagia y, aparentemente, la apoptosis no estar¨ªa involucrada.