ANTI-TUMOR EFFECTS OF CALCITRIOL AND DL-BUTHIONINE-S,R-SULFOXIMINE ON NEOPLASIC INTESTINAL CELLS

LIAUDAT A ; BOHL L ; TOLOSA DE TALAMONI N ; PICOTTO G

Jornada; XII Jornadas de Investigación Científica. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Médicas. Secretaría de Ciencia y Tecnología.; 2011

La incidencia y el pronóstico del cáncer de colon están en estrecha relación con los niveles plasmáticos de 25(OH)D3, metabolito indicador del estado nutricional de vitamina D. Por otro lado, la inclusión de drogas oxidantes tales como D,L-butionina-S,R-sulfoximina (BSO), aumentan la sensibilidad de las células neoplásicas a los tratamientos, especialmente en cánceres resistentes. El objetivo de nuestro trabajo fue determinar el efecto del calcitriol y BSO sobre la proliferación de las células de cáncer de colon y evaluar los posibles mecanismos involucrados. Para ello, las células Caco-2, derivadas de adenocarcinoma de colon humano, se trataron con calcitriol (1-200 nM),  BSO (2-500 uM), con ambas drogas o su vehículo a distintos tiempos de exposición. La proliferación celular se determinó por la técnica de cristal violeta. La actividad de las enzimas del sistema antioxidante superóxido dismutasa (SOD) y catalasa (CAT), así como la enzima marcadora de diferenciación celular fosfatasa alcalina (FAL) y los niveles de glutatión (GSH) se midieron por espectrofotometría. La apoptosis se evaluó mediante la tinción con V Anexina e Ioduro de Propidio, por la técnica de electroforesis de ADN en gel de agarosa y la actividad de caspasa 3. El potencial de membrana mitocondrial y el ciclo celular se evaluaron por citometría de flujo. Los resultados se analizaron estadisticamente mediante el test de ANOVA a una vía seguido del test de Bonferroni como post-hoc. Los resultados demuestran que tanto calcitriol como BSO inhibieron el crecimiento de las células Caco-2, efecto que resultó dependiente del tiempo y de la concentración de droga utilizada. El contenido total de GSH disminuyó a las 6 y 48 hs con BSO y con el tratamiento combinado. A las 96 hs tanto la actividad de CAT como el potencial de membrana mitocondrial aumentaron sólo con el tratamiento combinado y la actividad de SOD no se modificó. La actividad de FAL aumentó en las células tratadas con 1,25(OH)2D3  y con ambas drogas. El ciclo celular no se alteró. La evaluación del proceso apoptótico a través de las tres técnicas resulto negativo. En conclusión, BSO incrementa el efecto antiproliferativo del calcitriol sobre las células Caco-2 mediante aumento del estrés oxidativo, el cual puede ser sólo parcialmente compensado por el sistema enzimático antioxidante. La muerte celular por apoptosis no estaría involucrada. El incremento de FAL sugiere una inducción de la diferenciación celular debida al calcitriol.