1,25(OH)2D3 Y DL-BUTIONINA-S,R-SULFOXIMINA ESTIMULAN LA APOPTOSIS DE CÉLULAS DE CÁNCER DE MAMA

BOHL, L.; LIAUDAT, C.; MARCHIONATTI, A.; PICOTTO, G.; RODRÍGUEZ, V.; NARVÁEZ, C.; WELSH, JOE.; TOLOSA DE TALAMONI, N.

Córdoba

Otro; IX Reunión anual de trabajos científicos de la Sociedad de Endocrinología y Metabolismo de Córdoba (SEMCO); 2007

SEMCO

La apoptosis es un proceso fisiológico, activo y programado. Una resistencia anormal a la apoptosis puede provocar neoplasias u otras enfermedades. El 1,25(OH)2D3  (calcitriol) induce apoptosis en células tumorales de mama por disrupción de la función mitocondrial asociada con la translocación de Bax a la mitocondria, liberación de citocromo c  y producción de especies reactivas del oxígeno (ROS). Por otra parte, se conoce que los compuestos que disminuyen los niveles  de glutatión (GSH) intracelular pueden potenciar la acción de las drogas antitumorales en ciertos tipos de cáncer. Se sabe que DL-butionina-S,R-sulfoximina (BSO) produce disminución de la síntesis de GSH, inhibiendo a la enzima g-glutamil-cisteína sintetasa. El objetivo de nuestro trabajo fue estudiar los efectos sobre la apoptosis desencadenados por calcitriol  y/o drogas que disminuyen GSH intracelular (BSO) en líneas celulares de cáncer de mama, estrógeno-dependientes, sensibles (MCF-7) y resistentes a vitamina D (MCF-7DR). Para ello, se emplearon células MCF-7 y MCF-7DR las cuales se cultivaron en DMEM (5% FBS) y se trataron con calcitriol (100 nM), BSO (20 mM), calcitriol + BSO o vehículo (etanol < 0.1%) durante 96 horas. La proliferación celular se determinó por la técnica de violeta de cristal. La apoptosis se evaluó por la fragmentación del ADN (técnica de TUNEL) y mediante la determinación de la localización del citocromo c (inmunohistoquímica). La producción de ROS se determinó por citometría de flujo y los niveles de GSH, por espectrofotometría. Los resultados fueron evaluados estadísticamente mediante ANOVA a una vía, seguido del test de Bonferroni como test post-hoc. Las diferencias entre grupos se consideraron significativas a p<0.05. Los resultados muestran que tanto BSO como calcitriol inhibieron el crecimiento de las células MCF-7, siendo este efecto mayor cuando ambas drogas se administraron en forma conjunta. Como era esperable, el crecimiento celular de las MCF-7DR no respondió al 1,25(OH)2D3, pero fue sensible a BSO y al tratamiento combinado. La fragmentación del ADN aumentó y se estimuló la liberación de citocromo c de las mitocondrias al tratarse las células con calcitriol o calcitriol + BSO. El tratamiento con 1,25(OH)2D3 incrementó la producción de ROS, y este aumento fue mayor con el tratamiento conjunto. En las células MCF7DR, la producción de ROS sólo se modificó por el tratamiento con ambas drogas. Los niveles de GSH disminuyeron luego de la adición de  1,25(OH)2D3, BSO o de calcitriol + BSO al medio de incubación. En conclusión, BSO potencia el efecto inhibitorio del calcitriol  sobre el crecimiento de las células MCF-7 debido a que genera depleción del GSH intracelular, con incremento en la producción de ROS y desencadenamiento de mecanismos de apoptosis que involucran la fragmentación del DNA y la disrupción de la función mitocondrial.