EFECTO CITOPROTECTOR Y CITOTÓXICO IN VITRO DE LA CEPA PROBIÓTICA Kluyveromyces marxianus VM004 SOBRE CÉLULAS IEC-18

CENTOMO ANTONELLA; ROSSI YE; DÍAZ VERGARA L; BOHL LP; PORPORATTO C; CAVAGLIERI L. R; MONTENEGRO MA

Encuentro; I Encuentro Intersectorial sobre Innovación y Calidad en la Alimentación (EIICA 2021): "Innovar es una Apertura a la Realidad"; 2021

En la última década se ha producido, por parte de los consumidores, un aumento en la demanda de alimentos con potenciales efectos benéficos sobre la salud. En este contexto, la industria alimentaria se ha centrado en desarrollar nuevos productos alimenticios que contengan ingredientes que promuevan la salud. Por lo tanto, los agentes bioactivos tales como probióticos, prebióticos y antioxidantes, entre otros se consideran ingredientes potenciales y seguros para satisfacer la demanda del mercado mundial de nuevos productos funcionales. En este trabajo, se evaluó la citotoxicidad y citoprotección de la levadura probiótica nativa de lactosuero Kluyveromyces marxianus VM004 con el objetivo de evaluar su potencial como ingrediente funcional. Para ambos ensayos se sembraron células normales de epitelio intestinal murino de ratas (IEC-18) en placas de 24 pocillos (2,5x105 células/pocillo). Para evaluar la citotoxicidad se trabajó con concentraciones de levadura entre 5x10 4 y 8x105 lev/mL y se determinó la viabilidad con el ensayo de exclusión de células muertas con trypan blue (TB), utilizando la cámara de Neubauer para el recuento de las células viables. El efecto citotóxico se expresó como el porcentaje de viabilidad respecto al control. El ensayo de citoprotección de las levaduras fue evaluado frente al compuesto menadiona (MEN), inductor del estrés oxidativo. Las células fueron tratadas con MEN en el rango de concentraciones de 0,8 a 26 uM por 24h y para el ensayo de citoprotección fue seleccionada la concentración 7uM (mostrando entre 47 y 67% viabilidad). Se realizaron dos experimentos, en el primero, las células IEC-18 fueron pre tratadas con levaduras en el rango de concentraciones entre 1x104 y 5x105 lev/mL por 24h y luego expuestas a MEN (7uM) por 24h (pre-tratamiento). En el segundo, las IEC-18 fueron incubadas con levaduras (1x104 y 3x104 lev/mL) junto a MEN (7uM) por 24h (co-tratamiento). Después del ensayo, la viabilidad de las células fue evaluada con el ensayo de exclusión con TB. En cuanto a citotoxicidad, la viabilidad de las IEC-18 no mostró diferencias significativas con el control a concentraciones menores o iguales a 2x105 lev/mL, sin embargo a partir de 4x105 lev/mL, se observó una disminución de la viabilidad celular obteniendo valores de 68% y 63% cuando la concentración de levaduras fue 4x105 y 8x105 lev/mL respectivamente. Con respecto a la citoprotección, los pre-tratamientos no mostraron diferencia significativa con las IEC-18 tratadas con MEN, siendo la viabilidad entre 49 y 53%. Esto revela que los pre-tratamientos no tuvieron efecto citoprotector frente a MEN. Sin embargo, los co-tratamientos mostraron diferencia significativa frente al tratamiento con MEN, presentando viabilidades del 99 y 96%, revelando un marcado efecto citoprotector de las levaduras en co-tratamiento frente al agente estresor MEN (7uM), en un intervalo de concentraciones en los cuales la levadura no presentó citotoxicidad.