Estudio fitoquímico y biológico de la fracción de saponinas triterpénicas de Grindelia argentina

ALZA, N.P.; ORTMANN, S.; PFERSCHY-WENZIG, E.; KUNERT, O.; BAUER, R.; MURRAY, A.P.

Foz do Iguazu

Congreso; III Congreso Iberoamericano de Fitoterapia; 2012

Con el objeto de estudiar la potencial actividad anti-inflamatoria de la fracción cruda de saponinas de la especie vegetal Grindelia argentina Deble & Oliveira-Deble (Asteraceae) se evaluó la capacidad de la misma de inhibir la producción de óxido nítrico (NO). NO es un radical libre producido por tres enzimas, entre las cuales se encuentra la óxido nítrico sintasa inducible (iNOS) que genera NO a partir de L-arginina. La superproducción de NO inducida por la actividad enzimática de iNOS en distintos tipos de células ha mostrado jugar un rol importante en varios procesos inflamatorios e inmunomodulatorios1. Mediante el ensayo de Griess se ha determinado el porcentaje de inhibición de la formación de NO en macrófagos de ratón estimulados con LPS por parte de la fracción de saponinas, resultando ser de 84,7 +/- 5,0 % a una concentración de 50 microg/mL. Teniendo en cuenta este resultado, se ha decidido airlar e identificar las saponinas presentes en esta fracción. Se realizó una cromatografía en Sephadex LH-20 del subextracto n-butanólico de G. argentina empleando MeOH como solvente y se obtuvo la fracción cruda de saponinas. La misma fue sometida a una columna fase reserva RP-18 eluyendo con distintas mezclas MeOH:H2O y así se 13 fracciones (A-M). Se realizó RP-HPLC de la fracción G y se aisló el compuesto 1 eluyendo con CH3CN:H2O (24:76). A partir de la fracción H y empleando RP-HPLC se separaron los compuestos 2 y 3, utilizando como fase móvil CH3CN:H2O (28:72). El análisis estructural de los compuestos 1-3 se ha realizado mediante LC-MS y una combinación de RMN-1D (1H y 13C) y 2D (COSY, HSQC y HMBC). Estos productos naturales fueron identificados como saponinas triterpénicas, cuyas agliconas son derivados del ácido oleanólico: ácido poligalacico en el caso de 1 y bayogenina en el caso de 2 y 3. Cada aglicona se encuentra disustituida en las posiciones C-3 y C-28. La secuencia de la cadena glicosídica fue establecida mediante análisis de HMBC. Los compuestos 1 y 3 presentan la misma secuencia glicosídica tanto en posición C-3 como en posición C-28, diferenciándose así sólo en la presencia de ?OH en posición C-16 de la aglicona de 1. Por su parte, el compuesto 2 se diferencia de 3 en la cadena unida a la posición C-3, ya que no presenta Xyl ligada a Glu.Este trabajo constituye el primer reporte de caracterización completa de saponinas en el género Grindelia. Saponinas triterpénicas de estructura similar han sido aisladas de distintas especies vegetales y en algunos casos constituyen los compuestos responsables de la actividad anti-inflamatoria. Para completar el análisis estructural de las saponinas, nos encontramos realizando la determinación de la configuración de los azúcares que forman parte de la estructura de cada compuesto También se realizarán los ensayos para determinar la inhibición de iNOS de los compuestos puros con el fin de determinar el responsable de la actividad observada, y a la vez se evaluará la posible citotoxicidad de la fracción cruda de saponinas asi como de los compuestos 1-3