LA EXPRESIÓN DE LA ENZIMA TRANS-SIALIDASA INACTIVA DE TRYPANOSOMA CRUZI INCREMENTA LA VIRULENCIA DE TRIPOMASTIGOTES

JUAN M. BURGOS; CARLA PASCUALE; POSTAN, MIRIAM; ANDRES LANTOS; BERTELLI, ADRIANO; CAMPETELLA, OSCAR; MARÍA SUSANA LEGUIZAMÓN

Santiago de Chile

Congreso; XXIV Congreso Latinoamericano de Parasitologia; 2017

Federacion Latinoamericana de Parasitologia

La enzima trans-sialidasa (TS) es un factor de virulencia de T.cruzi que participa en eventos de invasión celular y sobrevida del parásito en estadio tripomastigote. Dentro de la familia de las TS existen miembros activos (TSa) con actividad trans-sialidasa, y miembros inactivos (TSi) que no poseen dicha actividad pero mantienen su capacidad de unión a azúcares tipo lectina. Estas dos isoformas poseen una alta homología diferenciándose, principalmente, en la Tyr342His del sitio catalítico. Ambas se encuentran discretamente distribuidas entre las poblaciones de T.cruzi. Mientras las 6 UDTs (unidades discretas de tipificación) parasitarias poseen genes codificantes para TSa, únicamente las UDTs II, V y VI poseen, además, genes codificantes de TSi. Interesantemente, entre estas últimas se encuentran las poblaciones parasitarias principales de la infección en el hombre, y las más virulentas en los ensayos en modelos murinos. Estas observaciones nos permitieron postular una funcionalidad de TSi relacionada a la virulencia parasitaria. En este trabajo presentamos la modificación genética de una población de T.cruzi carente natural de TSi (perteneciente a UDT I) y su posterior evaluación biológica. Los parásitos knock in de TSi (y de TSa como control, realizados en el vector de expresión pTrex-Omni) incluyen genes recombinantes con secuencia 3XFLAG que permite su reconocimiento y diferenciación de la TS endógena. Estudios de western blot, citometría, inmunofluorescencia y microscopía confocal determinaron la correcta expresión y distribución de TSi y TSa en los parásitos knock in. Ensayos de infectividad in vitro en células Vero, cardiocitos y fibroblastos mostraron que la poblacion TSi+ presenta mayor tasa de infección (p