La infección de astrocitos por Trypanosoma cruzi es citoprotectora y disminuye la muerte bystander en la co-infección por HIV

JAVIER URQUIZA; DIEGO OJEDA; MARÍA SUSANA LEGUIZAMÓN; JUAN M. BURGOS; JORGE QUARLERI

Congreso; XV Congreso Argentino de Infectología; 2015

Introducción: La meningoencefalitis chagásica puede desarrollarse en pacientes coinfectados donde la infección por HIVfavorece la reactivación de la infección por T.cruzi (Tc).La coinfecciónHIV-Tc puede producirse en células de la astrogliadel sistema nervioso central, desconociéndose su efecto sobre las mismas y las células vecinas (bystander)Objetivo: Evaluar in vitro el impacto de las infecciones únicas y co-infecciones (HIV-Tc) sobre la muerte celular deastrocitos humanos.Materiales y Métodos: Astrocitos humanos (U373) mantenidos en cultivo (DMEM+SFB, 37º C, 5% de CO2) fueroninfectados con tripomastigotes de Tc (cepa CL) (proporción célula:parásito 1:10). Luego de 24 hs, se infectaron con unclon de HIV (pNL43)-psedotipeado con virus de la estomatitis vesicular (VSV) y marcado con una proteína fluorescenteverde (GFP). Como controles se incluyeron astrocitos (i) sin infectar, (ii) mono-infectados por Tc, y (iii) por HIV. Tras 72hs, se evaluó por citometría de flujo la eficiencia de infección por HIV, y el nivel de muerte celular (NMC) porapoptosis/necrosis celular (tinción con anexina-V (AV) y7AAD). La apoptosis (A), la necrosis (N) y apoptosis tardía (AT),en los diferentes escenarios (sobre-infección e infecciones únicas) se analizaron según: AV+ /7-AAD- (A), AV-/7AAD+ (N)y AV+/7AAD+ (AT). Estos parámetros se evaluaron diferencialmente en cada cultivo tanto en células infectadas por HIV(GFP+), como en células ?vecinas? no infectadas por HIV (GFP-).Los valores son relativos (%) y se expresan como media±DS. El análisis estadístico se realizó por el test T Student yvalores de p<0.05 se consideraron significativos.Resultados: La eficacia de la infección por HIV (% de células HIV+) fue similar (p>0.05) como infección única(87,7±0,5), o ante la coinfección con Tc (81,2±8,0).Los NMC por apoptosis (A), apoptosis tardía (AT) y necrosis (N) en los astrocitos sólo infectados por Tc (A:1,7±0,0;AT:0,6±0.0; N:0,8±0,1) fueron significativamente menores comparado con células: i) HIV+ (A: 6,4±1,0; AT: 1,9±0,7; N:2,3±0,4); ii) HIV- de cultivos HIV+(A: 17,7±7,6; AT: 22,4±3,8; N: 15,7±1,5); y iii) HIV- de cultivos Tc-HIV(A: 14,7±6,9;AT:8,8±1,1; N:6,4±1,8).El NMC fue: (a) ligeramente mayor luego de infección única por HIV respecto de aquellas coinfectadas HIV/Tc (p=0.07)para las células HIV+.(b) significativamente menor en células HIV+ respecto de las HIV- (vecinas) en estos dos escenarios (sólo HIV,p=0.00002; HIV/Tc, p=0.001).(c) significativamente menor luego de la coinfección Tc/HIV respecto de la infección única por HIV (p=0.006), en lascélulas vecinas (HIV-). El máximo NMC fue hallado en astrocitos HIV- luego de infección única con HIV (44,1%±9,8).Conclusiones: La infección de astrocitos por Tc conduce a un marcado efecto citoprotector per se, capaz de disminuir elefecto bystander del HIV ante la coinfección. En modo semejante, la infección productiva por HIV ?única o en elcontexto de la coinfección con Tc- disminuye la muerte celular. Estas interacciones de HIV y Tc con los astrocitospueden alterar los mecanismos de daño celular contribuyendo a su parasitismo intracelular por períodos prolongados.