Detección de proteínas inmunogenicas en liquido INMUNOGÉNICAS EN LÍQUIDO PSEUDOCELOMICO DE DIOCTOPHYMA RENALE

MARCOS BUTTI; GISELA R. FRANCHINI; A. NAHILI GIORELLO; M. INES GAMBOA; NILDA E. RADMAN; BETINA CÓRSICO

Bariloche

Congreso; VII Congreso Argentino de Parasitología; 2015

Sociedad Argentina de Parasitología

Introducción: La dioctofimosis es una helmintiasis causada por Dioctophyma renale, (Goeze 1782), nematode conocido como "gusano gigante del riñón", que afecta a diversos mamíferos domésticos y silvestres. Los hospedadores definitivos y principales reservorios son los mamíferos carnívoros: perro, visón, lobo, zorro etc. En el hospedador definitivo, el parásito adulto se localiza generalmente en el riñón derecho y elimina huevos por orina. En ambientes acuáticos estos huevos larvados son ingeridos por el hospedador intermediario, comúnmente identificado como Lumbriculus variegatus, un anélido oligoqueto de agua dulce. Dentro de este organismo las larvas evolucionan hasta L3 y el ciclo se cierra cuando el hospedador definitivo se infecta ingiriendo el anélido (L. variegatus) infectado, o uno de sus depredadores (peces, ranas, anguilas). Se presenta en forma endémica en la región noreste del país y en la zona costera del Río de La Plata. Su diagnóstico resulta del análisis de orina, ecografías, maniobras quirúrgicas o necropsias. Localizaciones ectópicas (extrarrenales) del parásito, dificultan el diagnóstico debido a la falta de sintomatología específica.Objetivo: El objetivo de este trabajo es obtener una herramienta diagnóstica más sensible para poder detectar tanto estadios tempranos de la infección como localizaciones ectópicas. Materiales y métodos: presentamos la obtención y análisis de proteínas presentes en el líquido pseudocelomico obtenido de 2 ejemplares de D. renale hallados durante una nefrectomía de riñón derecho de un canino.Los ejemplares fueron lavados con buffer fosfatos pH 7,4 sobre una placa de Petri. A continuación se realizó una incisión sobre uno de los lados del gusano y se colectó el líquido pseudocelómico con una pipeta. El mismo fue filtrado y Se cuantificó la cantidad de proteínas mediante el método de Lowry y se procedió a realizar una electroforesis en geles de poliacrilamida SDS-PAGE.Técnica de ELISA: En primera instancia se realizó un ensayo de ELISA para determinar la reactividad de sueros infectados provenientes de perros diagnosticados positivamente para esta infección por otras técnicas. Para ello se sensibilizaron placas de ELISA con alícuotas de líquido pseudocelómico de D.renale y posteriormente se incubaron con los sueros caninos. Luego de extensivos lavados se reveló la interacción antígeno-anticuerpo utilizando un anticuerpo secundario anti-IgG de perro conjugado con la enzima peroxidasa.Los resultados mostraron una alta reactividad de dichos sueros contra las proteínas presentes en el líquido pseudocelómico.Con el objetivo de identificar aquellas proteínas con mayor poder inmunogénico presentes en el líquido pseudocelómico se realizó western blot utilizando los sueros caninos descriptos anteriormente.Técnica de western blot: Con el objetivo de identificar aquellas proteínas con mayor poder inmunogénico presentes en el líquido pseudocelómico se procedió realizar primero un SDS-PAGE. A continuación se realizó la transferencia de dichos geles a membranas de PVDF.Las membranas se incubaron con los sueros de perros descriptos anteriormente para la detección de aquellas proteínas con mayor poder antigénico y se revelaron utilizando el mismo anticuerpo secundario mencionado anteriormente.Resultados: En las corridas en geles de SDS page se detecta gran cantidad de una proteína de aproximadamente 45 KDa., esta proteína no sólo manifiesta una importante inmunoreactividad frente a suero de perro infectado con D. Renale. Esto lo hace sin duda la candidata para próximos trabajos donde se la pueda secuenciar, y poder demostrar con mayor exactitud las características, función y especificidad de la misma, así también como el avance y su uso en técnicas diagnósticas.