INVESTIGADORES
LAGARES Antonio
convenios, asesorías y/o servicios tecnológicos
Título:
IDENTIFICACIÓN DE ESPECIES MICROBIANAS POR ESPECTROMETRÍA DE MASA MALDI-TOF (ST3071)
Autor/es:
LAGARES A.
Fecha inicio:
2017-07-01
Fecha finalización:
2017-07-01
Campo de Aplicación:
Otros campos
Descripción:
Los aislamientos/cepas recibidas serán procesados a fin de obtener el extracto proteico. El método de extracción consiste en un lavado de las células con etanol 70% y la posterior suspensión de las mismas en una solución de acetonitrilo y ácido fórmico 70%. Un pequeño volumen de la suspensión (1 μL) es aplicado sobre una placa para el análisis de masas por MALDI y, una vez seca la muestra a temperatura ambiente, se adiciona sobre ella 1 uL de matriz (solución saturada de ácido alfa-ciano-4 hidroxicinámico en acetonitrilo: ácido trifluoroacético 50:2,5%). Los espectros de masas son obtenidos mediante el software FlexControl 3.3 en un rango de 2-20 KDa -detección de subunidades ribosomales y proteínas housekeeping principalmente- utilizando un espectrómetro de masas MALDI-TOF/TOF. La identificación microbiana se lleva a cabo ingresando los espectros de masas en el software MALDI Biotyper 3.1 (Bruker Daltonics) provisto de una base de datos de más de 5000 cepas de microorganismos y que emplea un valor de puntuación basado en el grado de coincidencia (relación m/z e intensidad) del espectro problema con un segundo espectro de referencia. De acuerdo con el valor de puntuación la identificación se establece a nivel de especie (2) o de género (1,7 -1,9).
