CARACTERIZACIÓN GENOTÍPICA DE UNA BACTERIA NODULANTE AISLADA DE PROSOPIS STROMBULIFERA

PATRICIA PICCOLI; PAULA CORNEJO; RICARDO MASUELLI; RUBÉN BOTTINI

Santa Rosa, La Pampa

Congreso; XXV Reunión Argentina de Fisiología Vegetal; 2004

Sociedad Argentina de Fisiología Vegetal

El objetivo de este trabajo fue el de completar la caracterización de este microorganismo por técnicas de Biología Molecular, e intentar su ubicación taxonómica. Un fragmento de 1500 pb del gen 16S ARNr fue amplificado utilizando los cebadores 27f y 1525 (CyberSyn). El volumen de reacción fue de 20 ml y contenía 4 mM de cada cebador, 200 mM de cada deoxinucleótidos (Promega), 1,5 mM de MgCl2 (Promega), 1X de buffer (Promega), 1 ml de ADN molde y 1 U de Taq polimerasa (Promega). Las amplificaciones de ADN se llevaron a cabo con el siguiente ciclo de temperaturas: 94°C: 3 min, 94°C: 30 seg x 30 veces, 55°C: 30 seg x 30 veces, 72°C: 2 min x 30 veces, 72°C: 25 min. Los productos de PCR (20 ml) fueron purificados con ¨QIAquick PCR purification Kit¨. Ambas hebras del fragmento de ADN fueron secuenciadas en Centro de Biotecnología de la University of Wisconsin, Madison. Los datos de las secuencias del gen 16S fueron comparados usando el programa BLASTN y CMBI, disponibles en la base de datos de GenBank y NCBI. De acuerdo a los datos obtenidos por la técnica de RNAr 16 S, la bacteria nodulante identificada tiene una homología de un 79-81 % con Sinorhizobium meliloti. Actualmente se está llevando a cabo la amplificacion de los genes de nodulación y fijación de N2, nodD, nodH, NodC y el gen estructural nifH.