PTH inhibe la señal de supervivencia de AKT en células de adenocarcinoma de colon humano CACO-2: participación de la fosfatasa PP2A y la via del AMPc.

CALVO N; RUSSO DE BOLAND A; GENTILI C

Mar del Plata, Buenos Aires

Congreso; LIV Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC); 2009

Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC)

AKT desempeña un rol central en la supervivencia celular, su fosforilación es estrictamente regulada, mediante la acción combinada de quinasas y fosfatasas. Previamente demostramos que la hormona paratiroidea (PTH) promueve la apoptosis en la línea celular Caco-2 y que modula la fosforilación de AKT en respuesta a la apoptosis mediante la serina/treonina fosfatasa PP2A. El objetivo de este trabajo es profundizar el estudio de los mecanismos moleculares involucrados en los efectos de PTH en estas células intestinales. Ensayos de inmunoprecipitación mostraron que el tratamiento con PTH (10-8 M, 48 horas) induce la asociación de AKT con la subunidad catalítica de PP2A e incrementa su actividad fosfatasa. Utilizando microscopía confocal se observó que PTH promueve la translocación de PP2A del citosol a la mitocondria, resultados que fueron confirmados mediante aislamiento subcelular seguido de Western blot. La hormona disminuye la viabilidad de estas células en un 56%, y el ácido okadaico (1nM), un inhibidor de PP2A, revirtió este efecto, sugiriendo que esta enzima participa en la viabilidad de las células Caco-2 dependiente de la hormona. Análisis por Western blot revelan que PP2A también desempeña un rol en la activación por PTH de caspasa-3 y la degradación de su sustrato PARP. Usando inhibidores específicos se demostró que la vía del AMPc contribuye a la desfosforilación de AKT y a la activación de PP2A inducidas por PTH, mientras que PKC y p38 MAP quinasa no participan en estos eventos. En resumen, estos resultados sugieren que la fosfatasa PP2A y la vía del AMPc actúan concertadamente para inactivar a AKT y provocar apoptosis en las células intestinales Caco-2 expuestas a PTH.