Mecanismos moleculares involucrados en los efectos pro-apoptoticos de PTH en las células intestinales Caco-2.

GENTILI C; CALVO N; RUSSO DE BOLAND A

Mar del Plata, Buenos Aires

Congreso; LIII Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC).; 2008

Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC).

La hormona paratiroidea (PTH) participa en la remodelación ósea y actúa regulando la homeostasis del calcio. Previamente demostramos que PTH promueve la apoptosis en la línea celular Caco-2 derivada de adenocarcinoma de colon humano defosforilando el factor pro-apoptótico Bad. El objetivo de este trabajo es profundizar el estudio de los mecanismos moleculares involucrados en los efectos de PTH en estas células intestinales. Akt controla el balance entre supervivencia y apoptosis y fosforila el residuo Ser-136 de Bad. Demostramos mediante Western blot que PTH (10-8M, 48 hs) no modifica la expresión de Akt, pero disminuye la fosforilación de su Ser-473. Este efecto es revertido por el ácido okadaico (1nM), sugiriendo que PTH  modularía a Akt mediante la activación de la serina-treonina fosfatasa PP2A. Además el inhibidor de PI3K, LY294002 (10 uM) suprimió totalmente la fosforilación de la Ser-473, demostrando que la activación basal de Akt es exclusivamente vía PI3K. Como la hormona disminuye la proliferación de las células Caco-2, los niveles proteicos de los reguladores del ciclo celular p53 y 14-3-3 fueron analizados por inmunocitoquímica y Western blot. PTH induce la expresión de 14-3-3 y no modifica p53. Por coinmunoprecipitación no se observó asociación entre 14-3-3 y el receptor de PTH1 en condiciones basales ni en células Caco-2 tratadas con la hormona, sugiriendo que 14-3-3 no regularía la localización subcelular del PTHR1. Sin embargo, PTH (48 hs) disminuyó la asociación basal de 14-3-3 con Bad, sugiriendo que Bad es previamente liberada de 14-3-3 para mediar los efectos de PTH. Estos resultados sugieren que la inhibición de la vía PI3K/Akt y la proteína 14-3-3 son parte del mecanismo por el cual PTH induce apoptosis en las células Caco-2. La acción pro-apoptótica de PTH en las células de adenocarcinoma de colon serían de potencial interés en medicina para generar nuevas estrategias terapéuticas en el tratamiento del cáncer humano.