INVESTIGADORES
DALAMON Viviana Karina
congresos y reuniones científicas
Título:
MULTIPLE LIGATION-DEPENDENT PROBE AMPLIFICATIONS (MLPA). APLICACION EN ARGENTINA DE UN NUEVO MÉTODO PARA EL ESTUDIO GENETICO DE PACIENTES Y PORTADORAS DE DISTROFIA MUSCULAR DE DUCHENNE/BECKER
Autor/es:
PIRRA L; DALAMON V; BOBILLO C; SALA A; MESA L; ELGOYHEN AB; CORACH D; DUBROSKY A.
Lugar:
Mar del Plata, Buenos Aires
Reunión:
Congreso; XLIV Congreso Argentino de Neurología; 2007
Resumen:
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Introducción
y objetivos: Para el
diagnóstico molecular de DMD (Distrofia Muscular de Duchenne) el método
habitualmente utilizado es la reacción de PCR (multiplex) que permite
identificar sólo deleciones en 18 de los 79 exones del gen de la Distrofina,
limitándose a varones afectados. MLPA es un nuevo método, recientemente
utilizado en nuestro país, que permite identificar deleciones y duplicaciones
en varones afectados y en portadoras mediante el screening de los 79 exones. El
objetivo es mostrar las mutaciones en una población argentina de pacientes y
portadoras de Distrofinopatías.
Material
y métodos: 13 DMD, 4 DMB
(Distrofia Muscular de Becker) y 7 portadoras. Se purificó ADN de leucocitos y
se utilizó para MLPA. Se emplearon sondas conteniendo
una secuencia universal para primers, una de longitud variable y una
complementaria al ADN. Fueron hibridizadas en posiciones adyacentes y ligadas.
Los fragmentos resultantes fueron amplificados por PCR usando un par de
primers. El producto fue identificado y cuantificado utilizando un
secuenciador, detectando el número de copias de los 79 exones del gen de la
Distrofina.
Resultados: Se identificaron 20 mutaciones que incluyen: 9
deleciones y 1 duplicación en DMD, 2 deleciones y 1 duplicación en DMB, 6
deleciones y 1 duplicación en portadoras.
Conclusiones:
Este método permite
investigar los 79 exones del gen de la Distrofina ampliando la capacidad de
detección de mutaciones. Su aplicación a poblaciones en riesgo (portadoras) y
pacientes con distrofinopatías hoy es posible en Argentina. Resulta ventajoso
por sobre los métodos conocidos y debería ser el de elección en esta patología,
sin aumento de los costos.