¿Es posible la tipificación de cepas de Trypanosoma cruzi a través del ADN kinetoplástico?

VELÁZQUEZ M; DIEZ C; MARCIPAR I

Mendoza

Congreso; VII Congreso Argentino de Protozoología y Enfermedades Parasitarias; 2005

El polimorfismo de las regiones hipervariables del ADN kinetoplástico de T. cruzi, fue propuesto para la caracterización molecular de poblaciones del parásito mediante métodos tales como RFLP o hibridación con sondas. Dado que las secuencias de las regiones variables presentan bajos niveles de similitud entre sí, ya sea dentro de un mismo minicírculo, como entre diferentes minicírculos de la red kinetoplástica de ADN, esto no sería consistente con las metodologías mencionadas, que han determinado que los amplificados de cepas definidas generan patrones únicos. Para explicar este fenómeno y así validar nuestra hipótesis de trabajo, que plantea que la variabilidad de los productos de PCR se presenta en mayor medida entre distintas cepas que dentro de una misma cepa, en el presente trabajo se evaluó la selectividad de esta técnica al amplificar fragmentos hipervariables. Se realizó un análisis de predominio de dichas secuencias mediante clonado, secuenciación y alineamiento de los fragmentos amplificados para la cepa patrón CL Brener. El producto de PCR de 330 pb fue obtenido por amplificación con los primers S121 y S122, y clonado en pGEM-T easy Vector (Promega). Se secuenciaron diez clones distintos para cada reacción de PCR realizada. Los resultados obtenidos demostraron un predominio del 40 al 50% de una secuencia hipervariable en particular, que se repetía en las distintas amplificaciones. A su vez se obtuvieron secuencias con un predominio menor y otras no repetidas. La secuencia predominantemente amplificada sería la responsable de los patrones característicos de cada cepa, lo que corroboraría la validez de utilizar la metodología de amplificación por PCR de secuencias hipervariables y su posterior análisis por RFLP o sondas para tipificar distintas cepas de T. cruzi.