ESTUDIO DE LA EXPRESIÓN DEL RECEPTOR DE ACTH (MC2R) Y Epac-2 A NIVEL ADRENAL EN RATONES INFECTADOS CON T. cruzi.

DA SILVA OLIVEIRA BARBOSA, ESDRAS; ROGGERO, EDUARDO; FLORENCIA GONZALEZ; BOTTASSO, OSCAR; PEREZ, ANA ROSA; VILLAR, SILVINA RAQUEL

Rosario

Congreso; XVII CONGRESO y XXXV REUNIÓN ANUAL DE LA SOCIEDAD DE BIOLOGÍA DE ROSARIO; 2015

Las citocinas pro-inflamatorias TNF-α, IL-6 y en menor medida INF-γ son capaces de estimular hipotálamo e hipófisis y liberar consecuentemente la hormonaadenocorticotrofina (ACTH). Esta última, actúa sobre los receptores de ACTH (MC2R)en la corteza adrenal para inducir la secreción de glucocorticoides (GCs) através de la vía de señalización dependiente de PKA. Además de esta vía clásica,se ha postulado una vía alternativa donde Epac 2 (del inglés ExchangeProtein directly Activated by cAMP 2) podría participar en la secreción de GCs de manera independiente de PKA.Previamente observamos quela infección por T. cruzi en ratonesC57BL/6 induce un aumento lento deGCs, los que al día 17 post-infección parecen independizarse de los niveles deACTH. Estos resultados sugieren que en la fase tardía de la infección la víaalternativa de producción de GCs cobraría mayor importancia, pudiendo deberseal menos en parte estas diferencias a cambios en la expresión de MC2R y Epac2. Poresto nuestro objetivo fue estudiar en nuestro modelo experimental los niveles de expresión adrenalde MC2R y de Epac2 a diferentes tiempos post-infección.  Para ello, se utilizaron ratones C57BL/6 (n=5-6grupo/día) que fueron infectados con 200 parásitos por vía subcutánea ysacrificados a los días 7, 14 y 17 post-infección (Tc7, Tc14 y Tc17). Enparalelo se procesó un grupo control (Co). Por citometría de flujo se determinóel nivel sérico de las citocinas TNF-α, INF-γ e IL-6, por ELISA los niveles deGCs y por RIA los de ACTH. A nivel adrenal se evaluó Epac2 por western blot yla expresión de MC2R medianteinmunohistoquímica y posterior cuantificación con el programa ImageJ. Losdatos se presentan como media±eem, las diferencias se expresan como *p<0,05vs Co; &p<0,05 vs Tc14. En el grupo Tc, TNF-α, INF-γ e IL-6aumentan respecto del grupo Co (p<0,05 en todos los casos). En los animales Tc,los niveles de GCs aumentan progresivamente a partir del día 10 post-infección (GCs,μg/dl= Co:3.1±1.3;Tc14: 12.3±10.7*; Tc17:37.6±4.1*,&).  Los niveles de ACTH no difieren entre Tc y Coal día 17 post-infección. La expresión de MC2R es máxima en Tc14 y disminuye enel grupo Tc17 sin alcanzar los niveles basales (MC2R, pixel/μm2= Co: 27±9; Tc7:22±10; Tc14:45±9*; Tc17:35±15*,&). La expresión de Epac2 en elgrupo Tc está incrementada respecto del grupo Co en todos los tiemposestudiados (p global<0,05). Los resultados obtenidos sugieren que lascitocinas inflamatorias estarían activando el eje hipotálamo-hipófisis-adrenal.Asimismo, la secrecióntardía de GCs podría deberse en parte a la vía alternativa, mediada por Epac2,ya que al día 17 post-infección Epac2 se encuentra aumentado, mientras que porel contrario la expresión de MC2R tiende a disminuir en presencia de niveles deACTH semejantes a los basales.