CARACTERIZACIÓN DEL INFILTRADO INFLAMATORIO EN TEJIDO ADIPOSO DURANTE LA INFECCIÓN AGUDA POR Trypanosoma cruzi

MÁRQUEZ, JULIA S.; GONZÁLEZ, FLORENCIA B.; ROGGERO, EDUARDO A.; VILLAR, SILVINA R., BOTTASSO, OSCAR A.; PÉREZ, ANA R.

Rosario

Congreso; XVI Congreso y XXXIV Reunión Anual de la Sociedad de Biología de Rosario; 2014

Sociedad de Biología de Rosario

El tejido adiposo (TA) no sólo participa en el metabolismo energético, sino que interviene activamente en la inmunidad innata y adaptativa. T. cruzi (Tc), agente causal de la Enfermedad de Chagas, puede infectar  adipocitos y persistir en el TA durante la fase crónica. Nuestro grupo comprobó que ratones C57BL/6 infectados con Tc desarrollan una enfermedad letal asociada a un marcado ambiente pro-inflamatorio y alteraciones endócrino-metabólicas que influenciarían el desenlace de la infección. A fin de profundizar en la respuesta inmuno-metabólica nos propusimos los siguientes objetivos: 1) estimar la lipólisis del TA, 2) caracterizar el infiltrado inflamatorio en TA y 3) evaluar distintos parámetros metabólicos sistémicos. Para ello los animales fueron inoculados con solución fisiológica (grupo Co; n=5) o infectados con 1000 Tc (grupo Tc; n=6) y sacrificados luego de 17 días post-infección (17 dpi). El peso corporal y la ingesta de alimento se registraron cada 3 días. Se obtuvo sangre por punción cardíaca y se extrajo el TA epididimal (TAE). La masa de TAE se pesó y una fracción del tejido se fijó y procesó mediante técnicas histológicas convencionales (H&E). La lipólisis se estimó a través de cambios en el peso del TAE y por el área promedio de los adipocitos, mediante microscopía y posterior análisis digital del área correspondiente a 10 adipocitos adyacentes. El área infiltrada se cuantificó con la misma técnica digital; mientras que las características del infiltrado se determinaron cualitativamente (ausente, leve, moderado o severo, focal o difuso) en al menos 3 secciones seriadas. La fracción restante del TAE se disgregó en forma enzimática (colagenasa II) a fin de obtener las células inmunológicas residentes y/o infiltrantes de dicho tejido para su posterior caracterización morfológica (H&E) y fenotípica (citometría de flujo) mediante la marcación con anticuerpos anti- CD4, CD8, CD11b, CD11c y Foxp3. En plasma de determinó glicemia, leptinemia, triglicéridemia y colesterolemia total, junto a sus fracciones HDL y LDL. El análisis estadístico de los datos se realizó mediante pruebas no paramétricas. Resultados: La infección cursó con hipoglicemia, hipoleptinemia, normotrigliceridemia e hipercolesterolemia a predominio de la fracción LDL. Luego de 17 dpi, la disminución del peso corporal y la ingesta fue evidente (p<0,05 vs. Co); manifestándose en paralelo a una reducción significativa en el peso del TAE y en el área de los adipocitos (Área -pixel2x104-, Tc=17.5±1.6, Co=41.6±2.5, p<0,0001). El grupo Tc desarrolló infiltrados inflamatorios focales y severos a predominancia de células mononucleares (CM) que ocupaban grandes áreas tisulares (Área -pixel2x106-, Tc=4.7±0.5, Co=sin infiltrado). Las CM del TAE provenientes del grupo Tc mostraron un incremento porcentual de linfocitos T CD8+, macrófagos (CD11b+/CD11c-) y células dendríticas (CD11b-/CD11c+) y una disminución en el porcentaje de células T reguladoras (Tregs) CD4+Foxp3+ (p<0.05 vs. Co en todos los casos). Los resultados demuestran que la infección provoca alteraciones en la mayoría de los parámetros metabólicos plasmáticos analizados; mientras que el infiltrado inflamatorio en TAE se caracterizó por un aumento en poblaciones citotóxicas y fagocíticas/presentadoras con disminución de células supresoras, lo que favorecería la producción de mediadores inflamatorios a nivel local y explicaría al menos en parte la importante lipólisis observada.  Financiamiento: PIP-CONICET, SecCyT-UNR, FONCYT.