ESTUDIO DE LAS VIAS INVOLUCRADAS EN LA APOPTOSIS DE LA GLÁNDULA ADRENAL DURANTE LA INFECCIÓN POR T.cruzi.

MARTINELLI ROMINA1, FLORENCIA GONZALEZ1, ESDRAS BARBOSA SILVA1, ROGGERO EDUARDO1,2, BOTTASSO OSCAR1, M. TERESA RONCO3, PÉREZ ANA ROSA1, VILLAR R SILVINA1.

Rosario

Congreso; XVI Congreso y XXXIV Reunión Anual de la Sociedad de Biología de Rosario; 2014

Sociedad de Biología de Rosario

La apoptosis o muerte celular programada juega un papel crítico tanto en situaciones fisiológicas como en ciertas patologías. Esta puede ser desencadenada por diferentes mecanismos que llevan a la activación de distintas caspasas, liberación de citocromo c  y al clivado del ADN: el mecanismo intrínseco implica la liberación mitocondrial del citocromo c por señales intracelulares de daño,  mientras que el extrínseco se origina por activación de los receptores de muerte, entre los que se incluyen los receptores Fas y FNT-R1. La glándula adrenal, juega un rol esencial en la respuesta al estrés inmunológico. Además, el FNT-α vía FNT-R1 no sólo conduciría a la liberación de señales pro-inflamatorias capaces de modular la liberación de glucocorticoides a través de interacciones in situ, sino que también participaría en la generación de señales apoptóticas. En relación a esto, comprobamos que en ratones C57BL/6 wild type (wt) infectados con T. cruzi (Tc), FNT-α modula la síntesis de glucocorticoides vía FNT-R1 y que paralelamente se observa un incremento del índice apoptótico adrenal. En este trabajo, nos propusimos determinar el/los mecanismo/s que desencadenan la apoptosis a nivel adrenal durante la infección causada por Tc y las posibles vías enzimáticas involucradas. Para ello se trabajó con animales controles C57BL/6 wt (Co-B6), deficientes en FNT-R1 (Co-R1), mutantes en el receptor Fas (Co-lpr) e infectados (Tc-B6, Tc-R1 y Tc-lpr respectivamente) (n=5/grupo). Tras 17 días post-infección, el índice apoptótico fue menor en las adrenales del grupo Tc-lpr que en los grupos Tc-B6 y Tc-FNT-R1 (p<0,05). La caspasa 8 (correspondiente a la vía extrínseca) mostró una mayor actividad en los animales Tc-B6 que en los Tc-R1 y Tc-lpr (Actividad relativa; Tc-B6/Co-B6: 0.85±0.07, Tc-R1/Co-R1:0.60±0.08#, Tc-lpr/Co-lpr: 0.68±0.07#, # p<0.05 vs TC-B6/Co-B6). La activación de las vías mediadas por Fas/FNT-R1 lleva al ingreso del t-Bid citosólico a la mitocondria, requisito para el escape de citocromo c. En función de esto se estimó la relación t-Bid Mitocondria/Citoplasma por western blot, la que estuvo aumentada en los grupos Tc-B6 y Tc-R1 (Co-B6: 1.0±0.3, Tc-B6: 3.3±0.7*, Co-R1:1.1±0.3, Tc-R1:1.5±0.3*#, Co-lpr: 1.0±0.2, Tc-lpr: 0.9±0.2#&, *p<0.05 vs respectivo control, #p<0.05 vs Tc-B6, &p<0.05 vs Tc- R1. La actividad de la caspasa 3 (que estima tanto vía extríseca como intrínseca), estuvo aumentada en los tres grupos infectados respecto a los respectivos controles (p<0.05), y sin diferencia entre ellos. La lipoperoxidacion es una resultante del stress oxidativo celular e induce la via intrínseca de apoptosis. La evaluación del nivel de lipoperoxidación por HPLC, mostró un aumento significativo en el grupo Tc-R1. Nuestros resultados sugieren que la apoptosis que se evidencia a nivel adrenal durante la infección por T. cruzi en animales wt parecería estar mediada principalmente vía receptor Fas, mientras que la apoptosis observada en la adrenales de los animales Tc-R1 podría corresponderse a un incremento en el  grado de stress oxidativo.