Estudio De La Actividad Antiviral De Derivados 5´-O-Carbonatos Sobre el Virus de la Hepatitis B (VHB)

GAGEY, D.; RAVETTI, S.; BRIÑÓN, M. C.; CAMPOS, R. H.; CAVALLARO, L. V.

Buenos Aires

Congreso; IX Congreso Argentino de Virología; 2008

Sociedad Argentina de Virología

ESTUDIO DE LA ACTIVIDAD ANTIVIRAL DE DERIVADOS 5´-O-CARBONATOS  DEL 3TC  SOBRE EL VIRUS DE LA HEPATITIS B (HBV) El virus de la Hepatitis B (HBV) perteneciente a la familia Hepadnaviridae, infecta a más de 400 millones de personas en el mundo. Alrededor de un 20% de los pacientes infectados con HBV progresan a hepatitis crónica, cirrosis hepática y hepatocarcinoma. La terapia aprobada para la infección crónica por HBV incluye al INF-a o PEG-INF y uno de los cuatro inhibidores nucleosídicos de la polimerasa como: lamivudina (3TC), adefovir, entecavir y telbivudina. Sin embargo el tratamiento es limitado debido a los efectos adversos del interferón y la adquisición de resistencia a los inhibidores nucleosídicos. Es por ello que es de gran interés la búsqueda de nuevas drogas u obtención de prodrogas de las ya conocidas con la finalidad de mejorar la actividad in vivo. La mayoría de las prodrogas de nucleósidos que han sido sintetizadas tienen como propósito disminuir la toxicidad asociada con análogos de nucleósidos, liberar especies activas por metabolismo degradativo de las prodrogas y favorecer la entrada de mayores cantidades de droga a la célula. En este trabajo se ensayaron distintos derivados 5´-O-carbonatos del 3TC que mejorarían considerablemente la capacidad para penetrar membranas lipídicas por difusión pasiva, debido a un aumento en la lipofilicidad respecto al 3TC. Así, dependiendo de la naturaleza del alcohol y por consiguiente de su estructura química, serian responsables de la velocidad de regeneración de 3TC y del mejoramiento de la actividad antiviral del mismo. Objetivo: Evaluar la actividad anti HBV in vitro de los derivados del 3TC medido como la disminución de la producción viral en células HepG2 2 .2.15.Metodología: Evaluación de la citotoxicidad de los compuestos por el método de MTS/PMS. Monocapas confluentes de células HepG2 2.2.15 en placas de 96 pocillos se tratan con las diluciones seriadas de los compuestos durante 9 días, cambiando el medio cada 3 días. El día 9 se mide la viabilidad celular por MTS/PMS.Evaluación de la actividad antiviral por determinación del DNA extracelular de HBV por SYBRGreen RealTime PCR cuantitativa. Monocapas confluentes de células HepG2 2.2.15 en placa de 24 wells se tratan durante 8 días con las diluciones de los compuestos, cambiando el medio por medio fresco conteniendo o no las diluciones de los compuestos cada dos días. El día 8 se cosechan los sobrenadantes, se extrae el DNA viral por el método de fenol/cloroformo/alcohol isoamílico y se precipita con etanol. La producción viral se cuantifica mediante real time PCR con primers que amplifican un fragmento de 120pb del gen core de HBV. Se calcula el porcentaje de inhibición del HBV DNA respecto al control sin tratar. Resultados: Citotoxicidad: todos los 5´-O-Carbonatos del 3TC presentan una CC50> 100 µM. En cuanto a la actividad antiviral se demuestra una inhibición de la replicación viral dosis dependiente para todos los compuestos evaluados. Para el 3TC la CE50 fue de 0,0019±0,0004 µM. Los derivados con 3, 4 y 5 carbonos presentan una actividad antiviral menor al 3TC; siendo las CE50 de 0,09 µM; 0,018 µM y >10 µM para el 2PRO 3TC, mPRO 3TC y BUTA y PENTA 3TC respectivamente. Mientras que los derivados de 6 y 8 carbonos presentan una actividad antiviral mayor que el 3TC , obteniéndose para el HEXA 3TC una CE50: 0,0006 µM y para el OCTA 3TC una CE50: 0,0008 µM. Conclusiones: Los derivados 5´-O-Carbonatos del 3TC con 6 y 8 carbonos podrían funcionar como prodrogas del 3TC, ya que presentan una actividad casi tres veces superior que el 3TC. Este tipo de modificaciones permitirían utilizar menor concentración de droga y en consecuencia menor toxicidad y probabilidad de selección de resistencia.