Estudio cinético de la inactivación por frío de F1

ANABELLA F. LODEYRO; OSCAR A. ROVERI

La Cumbre, ARGENTINA.

Congreso; XXVIII Reunión anual de la Sociedad Argentina de Biofísica; 1999

Sociedad Argentina de Biofísica

ESTUDIO CINETICO DE LA INACTIVACION POR FRIO DE F1. La ATPasa soluble mitocondrial (F1) se inactiva rápidamente por incubación a 0º. Ha sido descripto que la inactivación  ocurre en dos etapas, siendo la primera de ellas la transformación de F1 nativo en una especie con un coeficiente de sedimentación igual a 9.1 S. No ha sido aún establecido si dicha especie corresponde a una conformación del oligómero completo o a una disociación parcial del mismo en subunidades, ni tampoco si dicho intermediario retiene alguna capacidad catalítica. El objetivo de estos estudios es tratar de responder dichos interrogantes. Para ello se incubó F1 a 0º y se determinó la actividad del mismo a 30º y a distintas [ATP] en función del tiempo de incubación. Los decaimientos de actividad fueron monoexponenciales, de los cuales fue posible estimar los valores de las k de inactivación las que dependieron de la [ATP] en el medio de medida de acuerdo a la siguiente ecuación: k = 0.005 min-1 + 0.011 min-1 [ATP]/ (16 mM + [ATP]). El mejor ajuste de la actividad residual se logró sumando un término igual a una fracción de enzima con propiedades cinéticas iguales a la de la enzima nativa (equivalente a la suma de tres hipérbolas) y un término correspondiente a una hipérbola simple con KMdecreciente en función del tiempo de incubación a 0°. La fracción con propiedades cinéticas de F1 nativo, decayó de manera exponencial con el tiempo con una k = 0.0165 min -1. Estos resultados permiten concluir que en el proceso de inactivación por frío se forma un intermediario que ha perdido, al menos parcialmente, los efectos cooperativos presentes en la enzima nativa. Con subsidios de CONICET.