Lenta modificación por dilución del comportamiento cinético de F1 depletado de nucleótidos

ANABELLA F. LODEYRO; HUGO REINDERS; OSCAR A. ROVERI

La Plata, ARGENTINA

Congreso; XXVII Reunión anual de la Sociedad Argentina de Biofísica; 1998

Sociedad Argentina de Biofísica

LENTA MODIFICACION POR DILUCION DEL COMPORTAMIENTO CINETICO DE F1 DEPLETADO DE NUCLEOTIDOS.            Recientemente  hemos informado que la actividad ATPásica de F1 depletado de nucleótidos sigue una cinética no lineal con el tiempo aún en presencia de un sistema acoplado regenerante de sustrato. A [ATP]< 500 mM la velocidad inicial (vi) aumentaba y a [ATP] > 1000 mM  disminuía  hasta alcanzar un valor constante (vf). Los valores de vi obtenidos a [ATP] entre 5 y 2000 mM pudieron ser ajustados con un KM = 260 mM. Un comportamiento similar fue observado para las vf, siendo en este caso el KM(ATP) = 35 mM.             Estos estudios fueron realizados utilizando directamente la solución  de F1 (5 mg/ml) obtenida en el procedimiento utilizado para la depleción de nucleótidos.  Cuando previo a los ensayos cinéticos la solución de F1 antes mencionada fue diluída cinco veces en el mismo amortiguador (Tris-sulfato 50 mM, pH 8.0 en glicerol 50%), se observó que la actividad determinada utilizando  2000 mM ATP aumentaba lentamente, estabilizándose aproximadamente a las 4 hs, mientras que la actividad determinada utilizando 10 mM ATP prácticamente no se modificó durante el mismo tiempo. Por otra parte, a diferencia de lo observado con la solución inicial de F1, la dependencia de la vi y vf con la [ATP] no pudo se ajustada con una hipérbole simple. En particular para las vf pudieron ser claramente estimados dos valores de KM (40 y 700 mM). El anión activador bicarbonato, convirtió las cinéticas en hipérbolicas con valores de KM iguales a 275 (para las vi) y 77 mM (para las vf).             Se postula como hipótesis de trabajo que la lenta y parcial disociación de un nucleótido “firmememente unido” provoca una heterogeneidad del estado de ligando de las moléculas de F1  causando la aparente cooperatividad negativa observada con las diluciones de la enzima.