Cinética de la actividad ATPásica de F1 depletado de nucleótidos firmemente unidos. Efecto de bicarbonato

ANABELLA F. LODEYRO; HUGO REINDERS; OSCAR A. ROVERI

Mendoza, ARGENTINA.

Congreso; XXXIV Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación en Bioquímica y Biología Molecular; 1998

Sociedad Argentina de Investigación en Bioquímica y Biología Molecular

Cinética de la actividad ATPásica de F1 depletado de nucleótidos firmemente unidos. Efecto de bicarbonato.             Previamente informamos tres valores de KM(ATP) ( 4, 40 y 500 mM) para la actividad ATPásica de F1 de mitocondrias de corazón de bovino en estado estacionario. A concentraciones saturantes de bicarbonato, se observaron sólo dos KM(ATP)  (4 y 84 mM). La preparación utilizada en esos estudios contenía entre 2 y 3 moles de nucleótidos firmemente unidos por mol de F1.             El objetivo de estos estudios es determinar si la presencia de nucleótidos firmemente unidos afecta el comportamiento cinético de F1. La actividad ATPásica de F1 depletado parcialmente de nucleótidos ( » 0,5 moles de nucleótido / mol de F1) no fue lineal con el tiempo a pesar de que se utilizó un sistema acoplado regenerante de sustrato. Se observó  un aumento (a [ATP] <500 mM) o disminución (a [ATP] > 1000 mM) de la velocidad inicial (vi) hasta alcanzar un valor límite y constante de velocidad final (vf). Los ensayos se realizaron a [ATP] que variaron entre 5 y 2000 mM. Las vf dependieron de la [ATP] de acuerdo a una única hipérbola (KM = 35 mM, kcat = 330 s-1). En cambio, si bien los valores de vi pudieron ser ajustados con una sola hipérbola respecto de la [ATP] (KM = 235 mM, kcat = 433 s-1), el análisis del ajuste sugiere la presencia de un KM(ATP) correspondiente a un sitio de más alta afinidad. El agregado de 10 mM bicarbonato, si bien estimuló la actividad de F1,  no modificó de manera cualitativa el comportamiento temporal de las cinéticas. Sin embargo, tanto las vi como las vf dependieron de la [ATP] de manera michaeliana simple (vi: KM= 145 mM; kcat = 754 s-1; vf: KM= 35 mM; kcat = 532 s-1).             Es posible concluir que: a) la presencia de nucleótidos firmemente unidos afecta el comportamiento cinético de F1; y b) la actividad de F1  depletado de nucleótidos sigue siendo estimulada por bicarbonato.