Evaluación de la actividad inhibitoria del 6a-metansulfoniloxipenicilato de bencilo sulfona sobre la Elastasa Pancreática Porcina

G. COUX; A. LODEYRO; C. E. BOSCHETTI; E. G. MATA; O. A. MASCARETTI; O. A. ROVERI

Bariloche, ARGENTINA

Congreso; XXV Reunión anual de la Sociedad Argentina de Biofísica; 1996

Sociedad Argentina de Biofísica

EVALUACION DE LA ACTIVIDAD INHIBITORIA DEL 6a-METANSULFONILOXIPENICILATO DE BENCILO SULFONA SOBRE LA ELASTASA PANCREATICA PORCINA.               Previamente hemos estudiado el efecto inhibitorio de una serie de compuestos b-lactámicos sintéticos (penicilinas modificadas en las posiciones C3 y C6) sobre la actividad de la elastasa de páncreas porcino. El objetivo de esos estudios es determinar los requerimientos estructurales para que los mismos se comporten como buenos inhibidores de elastasas, que puedan llegar a utilizarse en la terapéutica de las múltiples patologías relacionadas con un desbalance en la regulación fisiológica de estas enzimas.             El 6a-metansulfoniloxipenicilato de bencilo sulfona fue uno de los más potentes inhibidores (IC50 =  2.2 ± 0.2 mM). Luego de 10 minutos de preincubación el valor de IC50 cayó sensiblemente a 0.13 ± 0.01 mM. La inhibición fue progresiva con el tiempo de reacción. Por tanto decidimos estudiarlo con mayor profundidad.             Se utilizó el método previamente reportado (Hart, G.J. and O´Brien, R.D. (1973) Biochemistry, 12, 2940), el que implica el monitoreo continuo del progreso de la reacción catalizada por la enzima a distintas concentraciones de sustrato y de inhibidor. Los valores de velocidad obtenidos a distintos tiempos luego del agregado del inhibidor siguieron un decaimiento exponencial simple. Se estimó el valor de la constante reacción de pseudo-primer orden (kobs). Los valores de kobs se ajustaron a una hipérbola rectangular respecto de [I](KM/ KM + [S]0),  de la cual se pudieron estimar los valores de   Ki ( 7.4 ±  1.4 mM) y de  kinact ( 2.5 ± 0.3 min-1).             Los resultados obtenidos sugieren que este inhibidor se comporta como un inhibidor basado en el mecanismo de reacción (inhibidor suicida).