INVESTIGADORES
AÑON Maria Cristina
congresos y reuniones científicas
Título:
Actividad antitrombótica de proteínas de amaranto sometidas a digestión gastrointestinal simulada. Identificación de su fracción activa
Autor/es:
SABBIONES, A.C; NARDO, A; SCILINGO, A.A; AÑON, MARÍA CRISTINA
Lugar:
Cordoba Capital
Reunión:
Congreso; V Congreso Internacional Ciencia y Tecnología de los Alimentos 2014; 2014
Resumen:
Existe una importante relación entre la alimentación y algunas
enfermedades prevalentes en el mundo. Tal concepto invita a explorar
propiedades biológicas de interés para la salud en diversas fuentes
alimentarias. Las proteínas de las semillas de amaranto han sido el objeto de
estudio de nuestro grupo de investigación como fuente potencial de compuestos con
acción fisiológica benéfica. Con el
objetivo de generar mayor conocimiento de las mismas se decidió explorar
la existencia de péptidos de amaranto con actividad antitrombótica. Con tal fin, se preparó un aislado proteico
a partir de harina desgrasada obtenida de semillas de Amaranthus hypochondriacus (Río Cuarto) mediante extracción a pH 9 y precipitación isoeléctrica a
pH 5. El aislado se sometió a digestión gastrointestinal simulada tratándolo
inicialmente con pepsina (0,1g pepsina/g proteína en 0,1N HCl y 0,03M
NaCl, pH 2) a 37°C
durante 1 hora, y luego con pancreatina (0,1g pancreatina/g proteína en 0,1M NaHCO3,
pH 6) en iguales condiciones. Las muestras se caracterizaron mediante la
determinación de la concentración proteica (Kjeldahl), del grado de hidrólisis
(OPA) y la realización de electroforesis Tricina-SDS-PAGE con y sin agente
reductor. Empleando el método de las microplacas se determinó la actividad
antitrombótica in vitro del aislado y
del digerido. Los resultados obtenidos
muestran que en las proteínas de amaranto se encuentran péptidos con actividad
antitrombótica que se liberan una vez que es sometido a la digestión
gastrointestinal simulada (Digerido: 68,4 ± 0,8 g proteína/g hidrolizado y
51,1 ± 3,8 GH%). El aislado
proteico (82,4 ± 1,6 g proteína/g aislado) no fue capaz de inhibir la coagulación a las
concentraciones estudiadas, mientras que el digerido presentó una curva de
inhibición del tipo dosis-respuesta que permitió calcular un IC50 de 0,23 ± 0,02 mg/ml. Mediante FPLC de
exclusión molecular se logró separar a partir del digerido una fracción activa
con comportamiento dosis-dependiente cuyo IC50 fue 0,07 ± 0,01 mg/ml. Dicha fracción se analizó
por espectrometría MALDI-TOF. Se identificaron 9 péptidos provenientes de la
globulina 11S y 6 péptidos de la lectina de amaranto. Mediante el uso de
herramientas bioinformáticas (composición aminoacídica, alineamientos
secuenciales con inhibidores de la trombina conocidos, screening molecular) se
analizaron las secuencias identificadas con el fin determinar las secuencias
candidatas a sintetizar para posteriores estudios.