Estudio de expansiones de linfocitos T: clonales vs reactivas

DIONISIO, L.; TORREGUITART F.; IOMMI P; GASPARINI N; AGRIELLO E.

Mar del Plata

Congreso; XX Reunión Anual de SAH; 2015

SAH

Introducción: las expansiones de linfocitos T comprenden un grupo heterogéneo tanto desde la clínica como del laboratorio. Por lo general son asintomáticas y se sospechan por la presencia de citopenias o leucocitosis. A diferencia de los SLPC B, no existe un marcador específico de clonalidad dificultando su identificación y caracterización. Para ello se estudia el reordenamiento de las cadenas del receptor TCR (αβ o γδ) por técnicas de biología molecular (BM) y citometría de flujo multiparamétrica (CFM). Sin embargo, la determinación de clonalidad no necesariamente implica malignidad. Objetivo: determinar el alcance de las técnicas de laboratorio CFM y BM en la identificación de expansiones clonales T, diferenciándolas de las reactivas. Material y métodos: se evaluaron 47 muestras (29 de sangre periférica, 14 de médula ósea y 4 de ganglios) pertenecientes a pacientes con sospecha de expansiones proliferativas. En todos se descartó VIH y EB. Se marcaron con anticuerpos monoclonales para CD2, CD3, CD4, CD5, CD7, CD8, CD25, CD26, CD27, CD28, CD30, CD38, CD45, CD45RA, CD45RO y CD56 y se utilizó un citómetro a 8 colores FACSCanto II (BD). Para evaluar el repertorio del TCR por CFM se utilizó el kit IOTest que evalúa 24 cadenas variables Vβ de TCR. Para determinar clonalidad mediante BM se utilizaron primers que hibridizan en distintas regiones conservadas de segmentos VJ del gen TCRγ, identificándose por electroforesis capilar. Se utilizó FISH para evaluar la t(2;5). Resultados: se encontró 19% de expansiones reactivas policlonales y 81% de expansiones clonales, siendo 95% αβ y 5% γδ. De las αβ, 58% fueron CD8, 36% CD4 y 6% CD4CD8. Dentro de las expansiones CD8 (Leucemia a Linfocitos Grandes Granulares, LLGG y expansiones T benignas autoinmunes) el perfil más frecuente fue: CD45+++ (maduro), CD3+débil (d)/++, CD8+d/++, CD5+d, CD7+d, CD2+d y CD38+/++, CD28-. Estas tuvieron neutropenia y signos de autoinmunidad, no obstante mostraron buena evolución, recibiendo inmunosupresión en algunos casos. Uno de estos pacientes presentó una expansión CD8 con co-expresión de 2 cadenas vβ. Además, se encontraron 2 linfomas anaplásicos, CD30++, CD5-, CD26+, HLA DR++, uno con t(2;5) positiva por FISH y ambos con mala evolución. No se observaron diferencias respecto a la edad y al sexo de los pacientes. Las expansiones CD4 (Leucemia Prolinfocítica T, LPL) resultaron CD45+++, CD3+d, CD7+d, CD5++, CD2++ y CD28+ con leucocitosis o hiperleucocitosis y adenopatías. Su curso fue más progresivo, con mala evolución requiriéndose tratamiento más agresivo y con una mortalidad del 80%. El 85% fueron varones mayores de 60 años. También se encontraron 3 casos con fenotipo asociado a Leucemia Linfoma T del Adulto (ATLL) con un fenotipo de marcada activación (CD3+, CD4++, CD8-, CD25++, CD28++, CD7-, CD5++, CD2+). Estos casos resultaron HTLV+, con mala evolución. Los casos CD4CD8 y γδ mostraron un curso indolente, sin adenopatías ni autoinmunidad y un fenotipo poco característico. Sólo se indicó tratamiento para la patología de base. Conclusiones: La CFM identificó expansiones de linfocitos T maduros y con características de célula activada y de memoria en forma clara y precisa. El análisis del repertorio Vβ de TCR determinó la clonalidad y el del rearreglo del gen TCRγ resolvió los casos complejos. Dado que se trata de patologías heterogéneas, resaltamos la importancia de interaccionar con el equipo clínico y de anatomía-patológica para lograr identificar entidades complejas rápida y correctamente.