Identificación de linfomas double hit: orientación desde la citometría de flujo

IOMMI P; TORREGUITART F.; DIONISIO, L.; LANG C.; AGRIELLO E.

Mar del Plata

Congreso; XX Reunión Anual de SAH; 2015

SAH

Introducción las expansiones de linfocitos T comprenden un grupo heterogéneo. Por lo general asintomáticas y se sospechan por citopenias o leucocitosis. No existe un marcador específico de clonalidad dificultando su identificación y caracterización. Para ello se estudia el reordenamiento de las cadenas del TCR (αβ o γδ) por biología molecular (BM) y citometría de flujo multiparamétrica (CFM). La determinación de clonalidad no necesariamente implica malignidad.Objetivos determinar el alcance de las técnicas de laboratorio CFM y BM en la identificación de expansiones clonales T, diferenciándolas de las reactivas.Material y métodos se evaluaron 47 muestras (29 sangre periférica, 14 médula ósea y 4 ganglios) de pacientes con sospecha de expansiones proliferativas. En todos se descartó VIH y EB. Se evaluó CD2, CD3, CD4, CD5, CD7, CD8, CD25, CD26, CD27, CD28, CD30, CD38 y CD45 y se utilizó un citómetro a 8 colores FACSCanto II (BD). Para evaluar el repertorio del TCR por CFM se utilizó el kit IOTest que evalúa 24 cadenas variables Vβ de TCR. Para determinar clonalidad mediante BM se utilizaron primers que hibridizan en regiones conservadas VJ del gen TCRγ, identificándose por electroforesis capilar. Se utilizó FISH para evaluar la t(2;5).Resultados se encontró 19% de expansiones reactivas policlonales y 81% de expansiones clonales, siendo 95% αβ y 5% γδ. De las αβ, 58% fueron CD8, 36% CD4 y 6% CD4CD8. Dentro de las expansiones CD8 (LLGG y expansiones T benignas autoinmunes) el perfil más frecuente fue: CD45+++ (maduro), CD3+débil (d)/++, CD8+d/++, CD5+d, CD7+d, CD2+d y CD38+/++, CD28-. Estas tuvieron neutropenia y signos de autoinmunidad, no obstante mostraron buena evolución, recibiendo inmunosupresión en algunos casos. Uno de estos pacientes presentó una expansión CD8 con co-expresión de 2 cadenas vβ. Además, se encontraron 2 linfomas anaplásicos, CD30++, CD5-, CD26+, HLA DR++, uno con t(2;5) positiva por FISH y ambos con mala evolución. No se observaron diferencias respecto a la edad y al sexo de los pacientes. Las expansiones CD4 (LPL) resultaron CD45+++, CD3+d, CD7+d, CD5++, CD2++ y CD28+ con leucocitosis o hiperleucocitosis y adenopatías, con mala evolución requiriendo tratamiento más agresivo y con una mortalidad del 80%. El 85% fueron varones mayores de 60 años. También se encontraron 3 casos con fenotipo asociado a ATLL (CD3+, CD4++, CD8-, CD25++, CD28++, CD7-, CD5++, CD2+), HTLV+, con mala evolución. Los casos CD4CD8 y γδmostraron un curso indolente, sin adenopatías ni autoinmunidad. Sólo se indicó tratamiento para la patología de base.Conclusiones La CFM identificó expansiones de linfocitos T maduros y con características de célula activada y de memoria en forma clara y precisa. El análisis del repertorio Vβ de TCR determinó la clonalidad y el del rearreglo del gen TCRγ resolvió los casos complejos. Dado que se trata de patologías heterogéneas, resaltamos la importancia de interaccionar con el equipo clínico y de anatomía-patológica para lograr identificar entidades complejas rápida y correctamente.