Expresión y rol funcional del receptor nicotínico alfa7 neuronal en células citotóxicas naturales

ZANETTI S.; DIONISIO, L.; ZIBLAT A. ; ZWIRNER N

Mar del Plata

Congreso; LVIII Reunión Anual de SAIC, Reunión Anual SAFIS, XLV Reunión Anual SAFE.; 2013

SAIC, SAFE y SAFIS

El receptor nicotínico alfa7 se encuentra en sistemanervioso donde media la entrada de calcio en respuesta a acetilcolina(ACh) e interviene en cognición, plasticidad sináptica,y neuroprotección. Además, se lo ha detectado en células noneuronales como los linfoctitos T y macrófagos, donde su rol esmenos claro. En este trabajo investigamos la expresión de alpha7 y suposible rol funcional en células citotóxicas naturales (NK) humanas.Mediante PCR y PCR en tiempo real detectamos expresiónde mRNA alpha7, indicando que estas células también expresan alpha7.Dicha expresión aumenta aproximadamente 3 veces en células NKactivadas durante 48 h con IL-12, IL-18 e IL-15. En esta condición,las células NK también expresan colina acetiltransferasa, enzimainvolucrada en la síntesis de ACh. Para determinar la presenciadel receptor en membrana plasmática evaluamos la unión dealpha-bungarotoxina-Alexa488 (alpha-Bgt, antagonista específico de alpha7)por microscopía confocal y citometría de flujo. Observamos quelas células NK en reposo unen alpha-Bgt, pero la intensidad de fluorescenciaaumenta luego de la estimulación. Además, mediantemicroscopía confocal y utilizando la sonda Fluo-3/AM detectamosun aumento de la fluorescencia de 1,5-2,5 veces con respectoal basal luego del agregado de nicotina (agonista nicotínico) encélulas NK activadas, demostrando así que los canales de α7son funcionales dado que median ingreso de calcio. Por último,al incubar células NK con IL-12, IL-18 e IL-15 observamos unadisminución en la producción de IFN-γ en presencia 10 microM denicotina. Este efecto se incrementa en presencia de PNU-120596,que actúa como potenciador de alpha7. Estos resultados sugieren quelas células NK expresan receptores alpha7 que modularían la funcionalidadde las células NK durante su activación por citoquinas derelevancia durante el diálogo recíproco con células dendríticas,lo que podría repercutir en la inmunidad anti-tumoral y anti-viral,donde las células NK juegan un rol clave.