Análisis del perfil proteico y antigénico de extractos polínicos de Beta vulgaris en la ciudad de Bahía Blanca

BIANCHIMANO, A.; MURRAY, M. G.; CARIGNANO, C.; PRAT, M. I.

Buenos Aires

Congreso; XXXVI Congreso Anual Asociación Argentina de Alergia e Inmunología Clínica; 2013

Asociación Argentina de Alergia e Inmunología Clínica

ANÁLISIS DEL PERFIL PROTEICO Y ANTIGÉNICO DE EXTRACTOS POLÍNICOS DE BETA VULGARIS EN LA CIUDAD DE BAHÍA BLANCA.BIANCHIMANO, A(1); MURRAY, M(1,2); CARIGNANO, C(3); PRAT, M(1)1)Universidad Nacional del Sur; 2)CONICET; 3)Municipalidad de Bahia BlancaEl polen de la familia Chenopodiaceae es uno de los más representativos de la ciudad de Bahía Blanca, ocupando uno de los primeros lugares como componente de la nube polínica. Entre las diferentes especies de esta familia se encuentra Beta vulgaris (acelga salvaje) cuya producción de polen ocurre entre los meses de octubre y noviembre. Se la ha señalado como responsable de alergias respiratorias, rinitis y conjuntivitis. Es escasa la bibliografía que reporta la composición proteica de los extractos polínicos de esta Chenopodiaceae. Considerando que la caracterización de los extractos polínicos es de relevancia tanto para el diagnóstico clínico como para la inmunoterapia, el objetivo de este trabajo fue caracterizar y comparar el perfil proteico y antigénico de extractos de polen de Beta vulgaris provenientes de plantas recolectadas en diferentes ambientes, con distinto grado de industrialización, durante el año 2011.Material y MétodosSe recolectaron granos de polen de Beta vulgaris en áreas con vegetación espontánea en la zona de Ingeniero White, polo industrial localizado a 10 Km del centro urbano de Bahía Blanca, y en el Barrio Patagonia, barrio parque perteneciente al éjido urbano de la ciudad. Las proteínas se extrajeron con PBS e inhibidores de proteasas, previa deslipidificación con acetona en frío y se cuantificaron por el método de Bradford. El antisuero policlonal (anti-Beta vulgaris) se obtuvo inmunizando conejos con 100 µg de proteínas con adyuvante de Freund completo. El perfil proteico se determinó por geles de Tricina-PAGE-SDS 12,5% y tinción con Coomassie Brilliant Blue. La reactividad frente al anticuerpo específico se estudió por Inmunoblot. La cuantificación de las bandas proteicas se efectuó con el programa Image J. El análisis estadístico se realizó a través del test de Tukey.ResultadosEl perfil proteico mostró al menos 12 bandas entre 5 y 90 kDa de PM en los extractos provenientes de ambas localizaciones. Se observaron dos bandas ubicadas en la zona de 24 y 31 kDa de PM en el extracto de Ingeniero White que no aparecen en el del Barrio Patagonia. Las más importantes desde el punto de vista cuantitativo fueron las de 17 y 43 kDa apareciendo diferencias cuantitativas significativas en la banda de 17 kDa. El anticuerpo anti-Beta vulgaris reconoce numerosas bandas entre 5 y 90 kDa de PM en ambos extractos, apareciendo diferencias cuantitativas en la antigenicidad de dos bandas ubicadas entre 10-12 kDa de PM. Conclusiones Los extractos polínicos de los dos ambientes estudiados presentan algunas diferencias cuali y cuantitativas en la expresión proteica. En ambos extractos se aprecian las bandas que caracterizan a la familia Chenopodiaceae, que son las de 17 y 43 kDa de PM, aunque la de 17 kDa es cuantitativamente mayor en el extracto de Ingeniero White. El perfil antigénico determinado con un suero policlonal de conejo es compartido en ambos extractos, con diferencias cuantitativas significativas en dos bandas ubicadas entre 10-12 kDa de PM. Los perfiles proteicos y antigénicos obtenidos contribuirán a la caracterización de los extractos polínicos de Beta vulgaris, especie de importancia alergológica y sobre la cual se reporta escasa bibliografía.