Caracterización de nuevos actinomycetes simbioticos (no-Frankia) fijadores de nitrógeno aislados de nódulos radiculares de Alnus acuminata.

VALDÉS, D; WALL LG

UNQ, Bernal, Pcia Buenos Aires

Congreso; 3ra Reunión de la Sociedad Argentina de Microbiología General; 2006

SAMIGE

A partir de nódulos radiculares de Alnus acuminata conservados a -20 oC y desinfectados superficialmente se obtuvieron actinomycetes fijadores de nitrógeno.  Los mismos fueron capaces de deformar pelos radiculares en raíces de Alnus acuminata y algunos de ellos indujeron división celular en la corteza de la raíz y fueron capaces de desarrollar escasos nódulos cuando fueron inoculados en alta dosis en A. acuminata. De uno de estos nódulos se ha podido reaislar un actinomycete morfológicamente idéntico al originalmente utilizado en el inóculo. Morfológicamente, al microscopio óptico, estos actinomycetes no muestran el esporangio multiloculado típico del género Frankia. Algunos de los actinomycetes aislados estimulan la nodulación cuando son inoculados en una relación de 10:1 con la cepa de Frankia ArI3, infectiva en Alnus. Cuando algunos de estos actinomycetes se coinocularon en A. acuminata en una relación 1:1 con la cepa heteróloga de Frankia BCU110501 aislada de Discaria trinervis y no infectiva en Alnus, encontramos que el aislamiento AaI4 se complementó fisiológicamente con la cepa BCU110501 para desarrollar nódulos maduros mientras que la inoculación control simple sólo desarrollo prenódulo en las raíces. En forma similar la coinoculación del aislamiento AaI5 con BCU110501 aumento su infectividad y capacidad de nodulación.  Para obtener una mejor caracterización morfológica los aislamientos AaI4 y AaI5 se  cultivaron en medio con y sin nitrógeno y se estudiaron por Microscopía Electrónica de Barrido. El análisis de AaI4 y AaI5 reveló morfologías similares: filamentos de diferentes grosores, algunos con largas extensiones segmentadas, otros con ramificaciones de distinto largo, esporas lisas en forma de bacilo de largo variable dispuestas en pequeñas cadenas a veces ramificadas semejando una mano o ramillete. En los cultivos sin nitrógeno, se observó en forma característica estructuras esféricas de 3 a 5 micrones de diámetro ubicadas en posición intermedia y en posición terminal en los filamentos que rememoran las vesículas de Frankia o los heterocistos de las cianobacterias. La observación por Microscopía Electrónica de Transmisión de los nódulos inducidos por estos aislamientos reveló la presencia de vesículas septadas en células infectadas, indistinguibles de las vesículas descritas para Frankia . El análisis de la secuencia del gen 16s ARN de los aislamientos AaI4 y AaI5 demostró que están estrechamente relacionados con diferentes especies de Nocardia,  sin embargo la morfología general no se corresponde con la descripta para este género, en particular la encontrada en medio sin nitrógeno.  Nuestros resultados sugieren fuertemente el descubrimiento de un nuevo grupo de actinomycetes simbióticos con la capacidad de fijar nitrógeno, complementarse fisiológicamente para la nodulación con Frankia  y desarrollar nodulación por si solos en Alnus acuminata y otras especies de Alnus.