Mutantes espontáneos fago resistentes de Lactobacillus plantarum. Aislamiento y caracterización de la fagorresistencia

BRIGGILER MARCÓ, M.; REINHEIMER, J.A.; QUIBERONI, A.

Buenos Aires

Congreso; XII Congreso Argentino de Microbiología; 2010

AAM

INTRODUCCIÓNLactobacillus plantarum es una especie bacteriana capaz de desarrollar en diferentes matrices alimentarias, y para algunas cepas han sido demostradas propiedades probióticas. Sin embargo, su empleo como starter/probiótico en la elaboración de alimentos funcionales podría ser afectado por infecciones fágicas, lo cual podría generar productos de baja calidad además de importantes pérdidas económicas. Entre las estrategias disponibles para disminuir los ataques fágicos, la obtención de mutantes espontáneos fagorresistentes se plantea como una excelente alternativa, simple y natural, ya que no presenta restricciones reglamentarias para su uso en alimentos.OBJETIVOSObtener mutantes espontáneos fagorresistentes a partir de cepas sensibles de Lactobacillus plantarum, utilizando dos metodologías diferentes.Caracterizar el fenotipo fagorresistencia de dichos mutantes.MATERIALES Y MÉTODOSCepas y fagos utilizadosSe utilizaron dos cepas de Lactobacillus plantarum (ATCC 8014 y PLN), dos fagos de colección (ATCC 8014-B1 y ATCC 8014-B2) y un fago aislado de gránulos de kefir (f3).Aislamiento de mutantes espontáneos fagorresistentesFueron ensayadas dos metodologías: aislamiento en medio agarizado y a partir de cultivos secundarios, utilizando los fagos individualmente o cócteles de ellos.Caracterización del fenotipo fagorresistencia en los mutantesEstabilidad de la fagorresitencia: repiques sucesivos de las variantes con el agregado de nuevas dosis de fagos.Nivel  de fagorresistencia (EOP - efficiency of plaquing): relación entre el título fágico logrado sobre el mutante resistente y el correspondiente a la cepa sensible.Nivel de adsorción fágica: determinación de la tasa de fagos adsorbidos luego de 30 min a 37ºC sobre las variantes fago resistentes, en comparación con la cepa sensible.Liberación espontánea de fagos: centrifugación de un cultivo de los mutantes, y posterior titulación del sobrenadante (fagos potencialmente liberados) sobre la cepa sensible.RESULTADOSLa técnica de aislamiento en medio agarizado permitió mayor recuperación de mutantes.El comportamiento durante los ensayos de estabilidad fue variable dependiendo del sistema estudiado.Los mutantes presentaron resistencia media (<10-4) y elevada (<10-7) de acuerdo a los valores de EOP obtenidos.En  general los mutantes fueron resistentes por bloqueo en la etapa de adsorción.Se observó liberación espontánea de fagos para 7 mutantes.CONCLUSIONESEste estudio demostró que es posible obtener variantes resistentes a fagos a partir de cepas sensibles de Lb. plantarum.