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Staphylococcus no-aureus (NAS), son agentes etiológicos de infecciones intramamarias bovinas. La patogenicidad de estas especies está asociada a factores de virulencia, como la formación de biofilm. Las rutinas de desinfección pre y post-ordeñe y las terapias antibióticas al secado, son ineficientes para prevenir o eliminar infecciones crónicas. La ineficacia de estos procedimientos conduce a buscar métodos de control alternativos, como vacunas. El objetivo de este trabajo fue evaluar la matriz del biofilm de una cepa NAS aislada de mastitis bovina como inmunógeno, asociado a quitosano o hidróxido de aluminio como adyuvantes. Para ello, se estudió cepas aisladas en la cuenca de Villa María, identificarlas por métodos bioquímicos y moleculares, se evaluaron factores de patogenicidad y la respuesta inmune inducida. Se evaluó la capacidad de formación de biofilm e interacción con células epiteliales mamarias de la línea comercias MAC-T de las 3 especies de NAS más prevalentes en la zona. Para caracterizar las respuestas inmunes se midió la concentración de citoquinas pro-inflamatorias IL-6 e IL-1β inducidas luego de la estimulación in vitro de la línea celular con las cepas en estudio (ELISA). Se seleccionó la cepa S. xylosus 222 como candidata para obtener el inmunógeno deseado. La misma fue identificada a nivel de especie por PCR-RFLP del gen gap y MALDI-TOF MS. Se obtuvo un inmunógeno a partir de una suspensión de la matriz del biofilm de la cepa S. xylosus 222, concentrada e inactivada. Para la inmununización se utilizaron 40 vaquillonas Holstein en el último trimestre de gestación, y se las dividió en 4 grupos (n=10). Cada uno de ellos recibió estas formulaciones: grupo no inmunizado (NI): 2 ml de solución fisiológica estéril (SF); grupo inmunizado control (Al): 2 ml del inmunógeno con hidróxido de aluminio como adyuvante (Ad); grupo inmunizado (QI): 2 ml del inmunógeno con quitosano como Ad; y grupo control de Ad (C): SF + Q. Se aplicaron dos dosis subcutáneas en la tabla del cuello, a los 60 y 30 días previos a la fecha de parto. Se recolectaron 10 ml de sangre de la vena coccígea a los días 0, 14, 21, 28, 35, 42 y 49 post-inoculación. Se determinaron los niveles de anticuerpos específicos IgG anti-la matriz del biofilm en suero por ELISA. Para ello, placas de 96 pocillos fueron sensibilizadas con la matriz de biofilm a una concentración de 1x109 UFC/mL, se incubaron los sueros diluidos, se usó un anticuerpo secundario anti-IgG bovina conjugado a peroxidasa y se reveló con una solución de sustrato/cromógeno TMB. Se pudo determinar que las bacterias con menor capacidad, mostraron una internalización significativamente mayor, y la sobrevida fue significativamente superior para S. xylosus. Al evaluar la interacción con MAC-T, sólo esta cepa desencadenó un incremento en la producción de ambas citoquinas. En el ensayo de inmunización in vivo, no se observaron reacciones adversas a la inoculación en ningún animal en estudio. En ambos grupos vacunados (QI y AL) se observó un incremento similar en los niveles de IgG séricas especificas, que en sus puntos máximos (14 y 7 días de cada dosis) llego a ser 50% superior respecto a los controles. Si bien los niveles de anticuerpos comenzaron a decaer a los 7 días de alcanzar el pico, se observó un nivel más sostenido luego de la segunda dosis en los grupos inmunizados. Mediante este estudio fue posible obtener un inmunógeno con una probada actividad in vitro e in vivo para generar respuesta contra estructuras y componentes bacterianos que cumplen un rol determinante, tanto en las primeras etapas de la interacción huésped-patógeno, como en la permanencia y en la evasión del sistema inmune, y en etapas más avanzadas de la infección.

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